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目的:研究大鼠脑缺血再灌注(IR)脑内巢蛋白(Nestin)和胶原纤维酸性蛋白(GFAP)表达变化及骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对它们的影响。
方法:
采用微动脉夹夹闭左侧颈总动脉的方法制作大鼠脑缺血再灌注模型:40只SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为正常组、假手术组、缺血再灌注组和MSCs治疗组;MSCs治疗组于缺血再灌注后1天、4天及8天经尾静脉注射MSCs(1×10<6>)后分别在缺血再灌注3天、7天、14天的各时间点处死动物,取前脑组织,用免疫组织化学方法检测各组大鼠脑内Nestin和GFAP的表达情况;用SPSS统计分析。
结果:
1、免疫组化检测各组大鼠脑组织中均可见Nestin蛋白阳性表达,阳性信号主要位于胞浆中。正常对照组及假手术组呈弱阳性表达,两组之间比较无差别(P>0.05)。缺血10min分别再灌注3d、7d大鼠脑组织中呈阳性表达,与正常对照组及假手术组比较有显著性差异(P<0.05)。
2、免疫组化检测正常对照组及假手术组SD大鼠脑组织中可见GFAP蛋白弱阳性表达,阳性信号主要位于胶质细胞的胞浆中,两组之间比较无差别(P>0.05),缺血10min分别再灌注3d、7d、14d大鼠脑组织中呈阳性或强阳性表达,与正常对照组及假手术组比较有显著性差异(P<0.05)。
3、免疫组化检测MSCs干预组在缺血10min后再灌注3d、7d、14d时,大鼠脑组织中Nestin和GFAP的表达趋势同缺血再灌注组,但阳性率高于缺血再灌注组,相同时间点比较有显著性差异(P<0.05);
4、大鼠缺血10min后再灌注3d、7d、14d时,脑组织石蜡切片HE染色光镜观察,随缺血时间点增加,神经元变性、坏死加重,胶质细胞增生明显。相同时间点相比,MSCs治疗组脑组织损伤程度均明显轻于脑缺血再灌注组。
结论:
1、正常大鼠脑组织中有Nestin和GFAP蛋白的表达。
2、大鼠脑缺血再灌注后,各缺血时间点脑内神经细胞Nestin和GFAP蛋白表达上调,有利于抵御脑缺血再灌注损伤,同时也表明两者与脑缺血损伤程度密切相关。
3、MSCs移植后GFAP和Nestin表达进一步增强。MSCs可激活大量的星形胶质细胞,改善神经元的内环境,保护神经元,促进其修复,有利于功能的恢复。