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目的:通过构建体外H9C2心肌细胞缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxgenation,H/R)模型,研究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)对H/R细胞的保护作用是否与内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ERS)存在联系以及右美托咪定是否可能通过P38-MAPK信号通路调控ERS。方法:1.体外培养H9C2细胞,建造H/R模型将体外培养的H9C2细胞随机分为对照组(细胞置于95%空气,5%CO2的培养箱中)和缺氧/复氧组(细胞迅速放入含1%O2,5%CO2和94%N2密闭缺氧罐中缺氧3h后,换含10%胎牛血清的DMEM培养液),分别置于常氧条件下培养3,6,12,24h。用CCK-8方法检测各组细胞的存活率,确定H9C2细胞缺氧/复氧的时间,制备H/R模型。2.右美托咪定对H/R心肌细胞的保护作用与ERS的关系将H9C2细胞随机分为(1)对照组;(2)DEX组;(3)H/R组;(4)DEX+H/R组;(5)4-PBA组(4-苯基丁酸钠组);(6)4-PBA+H/R组;(7)DEX+4-PBA+H/R组。运用细胞上清液检测LDH的浓度;用CCK-8方法观察心肌细胞的存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时以RT-PCR和Western blot分析检测各个实验组Grp78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白浓度的表达情况。3.右美托咪定与P38-MAPK信号通路关系将H9C2细胞随机分为(1)对照组;(2)TG组(毒胡萝卜素组);(3)DEX+TG组;(4)DEX+TG+4-PBA组;(5)SB202190(P38-MAPK磷酸化抑制剂)+TG组;(6)DEX+TG+SB202190组;(7)DEX+TG+4-PBA+SB202190组。运用细胞上清液检测LDH的浓度;用CCK-8方法观察心肌细胞的存活率;流式细胞术检测细胞凋亡情况,同时以RT-PCR和Western blot分析检测各个实验组Grp78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白浓度的表达情况。结果1.体外培养H9C2细胞,建造H/R模型除对照组外,心肌细胞缺氧3h复氧3h(H3/R3)存活率最低(P<0.01),缺氧后3h心肌细胞在复氧12h后存活率最高(P<0.05),而在复氧24h后细胞存活率反而降低(较复氧12h及复氧6h,P<0.05)。从而以缺氧3h复氧3h构建H9C2细胞的H/R模型。2.右美托咪定对H/R心肌细胞的保护作用与ERS的关系各个实验组在CCK-8,LDH及流式凋亡检测结果中均发现H/R组心肌细胞凋亡数量最多(P<0.01),与H/R组相比,DEX+H/R组与4-PBA+H/R组及DEX+4-PBA+H/R组细胞凋亡比例明显降低(P<0.05);而DEX+4-PBA+H/R组相对于DEX+H/R组与4-PBA+H/R组细胞凋亡数目有所减少(P<0.05)。RT-PCR和Western blot分析检测各个实验组Grp78、CHOP、Caspase-12的mRNA及蛋白浓度的表达情况表明:H/R组在基因及蛋白表达上明显上调(P<0.01)。与H/R组相比,DEX+H/R组与4-PBA+H/R组及DEX+4-PBA+H/R组表达上明显下调(P<0.05);而DEX+4-PBA+H/R组相对于DEX+H/R组与4-PBA+H/R组在表达上有所下调(P<0.05)。3.右美托咪定与P38-MAPK信号通路关系各个实验组在CCK-8,LDH及流式凋亡检测结果中均发现TG组心肌细胞凋亡数量最多(P<0.01),DEX+TG+4-PBA组细胞凋亡数目较DEX+TG组有所降低(P<0.05),DEX+TG+SB202190组细胞凋亡数目较DEX+TG组及SB202190+TG组有所减少(P<0.05),而DEX+TG+SB202190+4-PBA组较DEX+TG+4-PBA组、DEX+TG+SB202190组心肌细胞凋亡数量均明显减少(P<0.05)。RT-PCR和Western blot分析检测各个实验组Grp78、CHOP、Caspase-12蛋白浓度及mRNA的表达情况表明:TG组基因及蛋白表达上调(P<0.01),DEX+TG+4-PBA组较DEX+TG组在表达上有所下调(P<0.05),DEX+TG+SB202190组在表达上较DEX+TG组及SB202190+TG组有所下调(P<0.05),而DEX+TG+SB202190+4-PBA组较DEX+TG+4-PBA组、DEX+TG+SB202190组在表达上均明显下调(P<0.05)。结论1,通过H9C2细胞H/R模型的检测,验证了经H/R处理后的心肌细胞可引起内质网应激,从而降低细胞活力。2,右美托咪定预处理后,可抑制内质网应激作用从而发挥减轻细胞损伤的作用。3,右美托咪定预处理抑制内质网应激性细胞损伤可能是通过P38-MAPK信号通路发挥作用的。