三种氯霉素类药物在对虾体内残留消除的研究

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本文以凡纳滨对虾为研究对象,建立了同时检测对虾中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的HPLC-UVD法;建立了高效液相色谱-串联质谱法同时检测对虾中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺的方法;研究了上述三种氯霉素类药物在对虾养殖和加工过程中的残留消除规律。主要研究内容及结果如下:1、建立了对虾中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的HPLC-UVD法以2%碱性乙酸乙酯作为提取溶剂,正己烷脱脂后可直接经高效液相色谱进行分析。氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考在0.10~10.00mg/L范围内有良好的线性关系。在添加浓度为0.25~5.00mg/kg时,平均回收率为81.00~102.93%,RSD为1.95~7.10%。氯霉素的检出限为0.01mg/kg,甲砜霉素和氟苯尼考的检出限为0.02mg/kg。2、建立了高效液相色谱-串联质谱法检测对虾中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢产物氟苯尼考胺的方法以2%碱性乙酸乙酯提取,省去固相萃取(SPE)和液-液萃取(LPE)脱脂,浓缩后采用甲醇和5mmol/L乙酸铵溶液以0.25mL/min流速梯度洗脱,LC-MS/MS电喷雾电源(ESI),负离子,选择反应监测(SRM)模式检测。结果表明:三种药物及代谢物在0.1~20μg/L的范围内线性良好,相关系数R2为0.9997~0.9998。在添加浓度为1.00~5.00μg/kg时,平均回收率为78.17%~99.86%,RSD为2.18%~9.27%。氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺的检出限分别为:0.001μg/kg、0.020μg/kg、0.002μg/kg和0.003μg/kg。3、研究了三种氯霉素类药物在对虾养殖过程中的残留消除规律在试验水温28~30℃,1.7~2.0%的盐度条件下,用分别含0.5g/kg、1.0g/kg和2.0g/kg三个不同剂量氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考的饲料连续投喂10天,每天2次,研究氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在凡纳滨对虾血液、肌肉和肝胰腺组织中的残留消除规律。残留药物经提取后用HPLC-MS/MS检测。结果表明:(1)在给药期间,各剂量组三种氯霉素类药物在凡纳滨对虾肌肉、血液和肝胰腺中的残留量随着给药时间的延长含量逐渐增大,并在第10天达到最大值。最高剂量组的肝胰腺组织残留量最大,氯霉素为1827.89μg/kg,甲砜霉素为3710.00μg/kg,氟苯尼考为845.43μg/kg。(2)在停药期间,各剂量组三种氯霉素类药物在凡纳滨对虾肌肉、血液和肝胰腺组织中的残留随着停药天数的延长含量逐渐减少。高剂量组比低剂量组消除时间长,肝胰腺比血液和肌肉的消除时间长。氟苯尼考胺在对虾各组织中未检出。停药2~5天后,对虾各组织中三种药物残留量均在检出限以下。结合软件拟合的研究结果,三种药物在对虾体内的休药期为5天。4、研究了加工工艺对三种氯霉素类药物在虾肉中消除的影响研究了五种加工工艺对虾肉糜中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考消除的影响。空白虾肉中添加含三种氯霉素类药物的标准溶液制成含2.0μg/g剂量,5g大小的虾肉丸。虾肉丸中三种氯霉素类药物残留用HPLC-UVD法检测。用蒸、水煮、烘烤、油炸和微波加热五种工艺处理虾肉丸一定时间。(1)蒸8min后虾肉丸中三种氯霉素类药物残留量下降了41.99~44.50%,水煮8min后三种氯霉素类药物残留量下降了53.93~56.19%,烘烤4min后三种氯霉素类药物残留量下降了93.31~95.47%,油炸4min后三种氯霉素类药物残留量下降了93.30~94.91%,微波加热2min后三种氯霉素类药物残留量下降了29.37~41.86%。(2)五种加工工艺条件下,氟苯尼考降至MRL以下需要的时间最短,其次是甲砜霉素,氯霉素最长,其中烘烤和油炸对减少三种氯霉素类药物的残留最有效。
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