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本研究以我国较名贵的海水经济鲆鲽鱼类——半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为实验对象,在室内流水养殖系统中进行摄食生长试验,研究饲料中不同脂肪和花生四烯酸(20:4n-6, arachidonic acid, ARA)水平对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶活力以及脂肪酸组成的影响,并在此基础上探讨其体内脂肪和ARA的代谢机理。主要研究内容及结果如下：1、饲料中不同脂肪水平对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶活力及脂肪酸组成的影响以平均初始体重54mg的35日龄半滑舌鳎稚鱼为实验对象,研究饲料中不同脂肪水平对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶活力及鱼体脂肪酸组成的影响。以大豆卵磷脂以及鱼油为主要脂肪源,通过调节鱼油添加量制成5种不同脂肪水平(6.68%、9.84%、13.47%、17.89%和21.88%)的等氮微颗粒饲料,以生物饵料(卤虫)作为对照组。每个处理三个重复,每个重复150尾鱼,养殖实验周期为30d。实验期间,水温控制在23±1℃,盐度30±3‰,白天水体表面的光照强度大约7.9WM-2。实验结果表明,随着饲料中脂肪含量从6.68%增加到13.47%,存活率(SR)和特定生长率(SGR)显著升高(P<0.05)。当饲料中脂肪含量超过13.47%时,SR和SGR均显著下降(P<0.05)。然而,所有饲料组的SR均显著低于生物饵料对照组。饲喂脂肪水平为13.47%和17.89%的稚鱼,其肠段和胰段的蛋白酶、脂肪酶、碱性磷酸酶(AP)和亮氨酸氨肽酶(LAP)活力均高于其他处理组以及对照组,淀粉酶则呈现相反的变化趋势。鱼体脂肪酸组成总体上反映了饲料脂肪酸组成,但鱼体中单不饱和脂肪酸(MUFA)及n-6多不饱和脂肪酸(n-6 PUFA)低于饲料中的相对含量,13.47%和17.89%处理组的稚鱼鱼体中DHA(Docosahexaenoic acid)和EPA (Eicosapentaenoic acid)相对含量要略高于其他处理组。综上所述,饲料中适宜的脂肪水平能显著提高半滑舌鳎稚鱼的生长存活和消化酶活力,同时鱼体脂肪酸组成显著受到饲料脂肪酸组成的影响。以特定生长率为评价指标,采用二次曲线分析,得出半滑舌鳎稚鱼微颗粒饲料中最适的脂肪水平为13.56%。2、半滑舌鳎稚鱼中脂肪合成及分解代谢关键酶基因核心序列的克隆、序列分析及饲料不同脂肪水平对其mRNA表达量的影响本实验克隆了半滑舌鳎脂肪合成关键酶基因(乙酰辅酶A羧化酶Acetyl-CoA carboxylase, ACC和脂肪合成酶Fatty acid synthase, FAS)以及脂肪分解关键酶基因(激素敏感脂肪酶Hormone-sensitive lipase, HSL和脂肪甘油三酯脂肪酶Adipose triglyceride lipase, ATGL) cDNA部分序列,并探讨了饲料中脂肪水平对半滑舌鳎稚鱼ACC、FAS、HSL及ATGL基因表达的影响。克隆所得到的ACC1、 ACC2、FAS、HSL和ATGL片段长度分别为661bp、732bp、505bp、589bp和581bp,序列和系统进化分析表明半滑舌鳎的ACC1、ACC2、FAS、HSL和ATGL与大部分鱼类具有较高的同源性。采用鱼油配制成5种脂肪水平分别为6.68%、9.84%、13.47%、17.89%和21.88%(干物质)的等氮饲料,饲养35日龄半滑舌鳎稚鱼30 d,养殖过程中每天饱食投喂5次,养殖实验结束后采用实时荧光定量PCR,分别测定各处理稚鱼内脏团的ACC1、ACC2、FAS、HSL及ATGL mRNA相对表达量。结果表明,饲料脂肪水平对ACC1和ACC2基因的mRNA相对表达量均没有产生显著影响(P>0.05)。高脂饲料(21.88%)显著抑制了半滑舌鳎稚鱼内脏团FAS基因的表达,同时促进了HSL基因的表达(P<0.05),但饲料脂肪水平对于半滑舌鳎稚鱼内脏团的ATGL表达量没有产生显著影响(P>0.05)。3、饲料中不同ARA水平对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶活力及脂肪酸组成的影响以平均初始体重54mg的35日龄半滑舌鳎稚鱼为实验对象,研究饲料中不同ARA水平对半滑舌鳎稚鱼生长、消化酶活力及鱼体脂肪酸组成的影响。以脱脂白鱼粉、酪蛋白、磷虾粉、鱿鱼粉以及水解鱼蛋白为主要蛋白源,通过调节ARA富含油水平制成6种不同ARA水平(0.01%,0.39%,0.70%,1.07%,1.42%和2.86%干物质)的等氮等脂微颗粒饲料,每个处理饲料中DHA/EPA的比值固定在2.0左右。每个处理三个重复,每个重复180尾鱼,养殖实验周期为30d。实验期间,水温控制在23±1℃,盐度30±3‰,白天水体表面的光照强度大约7.9WM-2。实验结果表明,当饲料ARA水平为1.42%时,其存活率(SR)和特定生长率(SGR)显著高于其他处理组(P<0.05),随着饲料中ARA含量的增加,肠段及胰段的蛋白酶、碱性磷酸酶(AP)和亮氨酸氨肽酶(LAP)活力均呈现先升高后降低的趋势,且最大的酶活力出现在1.07%或者1.42% ARA处理组,淀粉酶则呈现与蛋白酶相反的变化趋势。鱼体脂肪酸组成总体上反映了饲料脂肪酸组成,随着饲料中ARA水平的升高,稚鱼鱼体EPA含量呈现减少趋势。综上所述,饲料中较高的ARA水平(大约1.07%-1.42% 干物质)能显著提高半滑舌鳎稚鱼的生长存活及消化酶活力、影响鱼体脂肪酸的组成。4、半滑舌鳎稚鱼中花生四烯酸(Arachidonic acid, ARA)主要代谢路径关键酶基因的克隆及饲料不同ARA水平对其mRNA表达量的影响环加氧酶(COX)、脂加氧酶(LOX)以及细胞色素P450氧化酶(CYP450)是ARA代谢生成类烯酸的三条主要路径中的关键酶。本实验成功克隆得到COX-1a、COX-1b、COX-2、5-LOX及CYP2J6-like基因部分片段序列,其长度分别为1021bp、721bp、1021bp、961bp和901bp。将这些序列提交到NCBI的Genebank,分别获得登录号为KF533723、KF533724、KF533725、KF533726和KJ578726。序列和系统进化分析表明,半滑舌鳎的COX-1a、COX-1b、COX-2、 5-LOX及CYP2J6-like与大部分鱼类具有较高的同源性。本实验也探讨了饲料中不同ARA水平对半滑舌鳎稚鱼COX-1a、COX-1b、COX-2、5-LOX及CYP2J6-like基因表达的影响。饲喂35日龄半滑舌鳎稚鱼6种不同ARA水平(0.01%,0.39%,0.70%,1.07%,1.42%和2.86%干物质)的等氮等脂微颗粒饲料30d,养殖过程中每天饱食投喂5次,养殖实验结束后采用实时荧光定量PCR分别测定各处理稚鱼内脏团的COX-1a、COX-1b、COX-2、5-LOX及CYP2J6-like相对表达量。结果表明,饲料ARA水平对COX-1a、COX-1b和CYP2J6-like基因的mRNA目对表达量均没有产生显著影响(P>0.05)。但饲料中添加1.07%或1.42%的ARA显著增加了COX-2和5-LOX基因的相对表达量(P<0.05)。