Dent病是一种罕见的遗传性近端小管病,目前对这一疾病的认识尚不足。Dent病的表型异质性导致了它有几种不同的分类,但现在广泛接受的是低分子量蛋白尿、高钙尿症和肾钙质沉着/肾结石是所有Dent病类型的共同病理特征。肾近端肾小管的上皮细胞拥有特别发达和有效的内溶酶体途径,可以重吸收大量过滤的溶质。先天性或后天性疾病引起的内体和/或溶酶体途径功能障碍通常导致近端肾小管细胞的功能障碍,从而引起大量的溶质丢失和严重的代谢并发症,最终导致Dent病的发生和慢性肾脏疾病的发展（CKD）。最初,在Dent疾病的临床体征中低估了肾小球的病理表现,或仅将其视为肾小管损害的结果。然而近来发现肾小球区室CLCN5和OCRL的表达异常与肾小球的损伤密切相关。足细胞损伤是造成肾小球病变的主要原因,各种原因引起足细胞损伤,导致足突出现融合甚至消失,最后导致足细胞的凋亡及坏死以及蛋白尿的发生。因此在肾小管疾病中除了肾小管本身,足细胞在蛋白尿发生的过程中可能也扮演着重要的作用。OCRL是肌醇多磷酸5-磷酸酶,OCRL的突变或缺失可以引起LOWE综合征和Dent病2型。目前新的OCRL的突变类型在肾小管细胞和足细胞中的具体作用并不明确,因此系统研究新发突变在肾小管和足细胞中的作用机制,为Dent病2型提供新的治疗靶点具有重要的意义。目的:1.OCRL在人的2型Dent病中肾脏的表达模式以及在细胞系的表达模式。2.OCRL的敲低及突变过表达对肾小管细胞的功能的影响。3.OCRL敲低后对足细胞功能的影响以及在足细胞损伤中的相关机制研究。材料及方法:首先我们通过免疫组化及免疫荧光（Immunofluorescence,IF）检测OCRL在人Dent病2型病人肾脏组织中的表达,然后在体外人肾小管细胞系（human kidney2,HK-2）中通过OCRL的敲低以及过表达突变的OCRL序列,研究其对肾小管细胞的骨架,内吞,活性氧水平,磷脂酰丝氨酸（PS）外翻,晶体在细胞表面粘附等功能的影响;同时在体外小鼠足细胞系（mouse podocyte cell line,MPC5）通过OCRL敲低研究对足细胞骨架,迁移,粘附,内吞等功能的影响,最后通过转录组测序进一步探讨OCRL在足细胞损伤中的相关分子机制。结果:1.免疫组化及免疫荧光结果显示在Dent病2型中,OCRL同时表达在在肾小管细胞以及肾小球足细胞中。2.在体外HK-2细胞系中OCRL的敲低和过表达突变均可导致小管细胞的吞噬功能减弱,PS外翻增多,晶体粘附增强,同时流式凋亡结果显示OCRL敲低以及突变过表达可以增加HK-2细胞的凋亡。3.体外小鼠足细胞系OCRL敲低后,足细胞相关功能检测显示足细胞的迁移能力增强,吞噬功能减弱,细胞的粘附功能未出现变化。细胞骨架免疫荧光染色结果显示OCRL敲低后对足细胞骨架F-肌动蛋白（F-actin）未造成损伤。4.小鼠足细胞敲低组和对照组的转录组测序对比结果显示OCRL敲低导致了细胞周期通路上多个蛋白的表达降低,包括细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2A（cyclin dependent kinase inhibitor 2A,Cdkn2a）,细胞周期蛋白D1（cyclin D1,Ccnd1）,转录因子1（E2F transcription factor 1,E2f1）。结论:1.OCRL在肾小管中和肾小球足细胞中都有丰富的表达,说明OCRL在小管细胞和足细胞中均中具有重要作用。2.在HK-2系细胞敲低OCRL以及过表达突变的OCRL基因会导致细胞损伤,如肾小管细胞ROS产生增多,细胞活力下降,磷脂酰丝氨酸（PS）外翻增多,同时导致其对晶体的的粘附能力增强,肾脏草酸钙一水合物粘附沉积,以及内吞功能下降,最终引起对滤过蛋白质的处理能力降低。3.在足细胞内敲除OCRL后,引起足细胞的黏附能力,内吞作用下降进而导致足细胞的损伤。这表明OCRL是足细胞维持正常的细胞形态及发挥正常的细胞功能必不可缺少的组成成分。4.OCRL敲低导致了足细胞细胞周期通路上多个蛋白包括Cdkn2d、Ccnd1、E2f1的表达的降低,且E2f1与OCRL有较为直接的蛋白质相互作用。