嗜线虫致病杆菌对非靶标生物的安全性评价

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嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophila)HB310菌株是从河北省土壤中的小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocaposae)肠道内所分离到的共生细菌,该菌株对多种昆虫具有口服杀虫活性。为探索该菌株作为杀虫制剂或杀虫基因应用于生产的可行性,本研究以赤眼蜂、中红侧沟茧蜂、异色瓢虫和家蚕为主要试虫,研究了HB310菌液及其蛋白毒素对非靶标生物的安全性,同时研究了HB310菌株对甘蓝田生物多样性的影响。主要研究结果如下:1.嗜线虫致病杆菌HB310菌液和蛋白毒素粗提物对寄生麦蛾卵的甘蓝夜蛾赤眼蜂和螟黄赤眼蜂的羽化率无影响。饲喂含HB310菌液、细胞以及上清液的蜂蜜能明显缩短甘蓝夜蛾赤眼蜂和螟黄赤眼蜂成蜂的寿命,并且浓度越大,寿命越短。饲喂含HB310毒素Ⅱ的浓度低到1μg/mL的蜂蜜时对两种赤眼蜂寿命没有影响。2.嗜线虫致病杆菌HB310菌液和蛋白毒素对中红侧沟茧蜂发育茧和滞育茧的羽化率无不良影响。中红侧沟茧蜂成蜂直接饲喂含HB310菌液和蛋白粗提物的蜂蜜,其寿命随浓度增大而缩短,但HB310蛋白毒素粗提物浓度降低到100.00μg/mL时中红侧沟茧蜂的寿命与饲喂蜂蜜的无差别,饲喂20μg/mL HB310毒素Ⅱ,寿命显著短于对照。中红侧沟茧蜂接种5日龄的棉铃虫后,改饲喂毒素处理的饲料,对中红侧沟茧蜂的一系列生理指标都无显著影响,而从棉铃虫初孵幼虫开始,持续饲喂处理饲料,直至中红侧沟茧蜂出茧,HB310菌液对中红侧沟茧蜂的各项生育指标无显著影响,但是,寄生于持续取食227.04μg/mL HB310蛋白毒素粗提物的棉铃虫,中红侧沟茧蜂的卵-幼虫期显著长于对照,而茧重、出茧率、羽化率以及成蜂寿命与对照无显著差别。3.以HB310菌液和蛋白毒素粗提物处理的桃蚜和小菜蛾饲喂异色瓢虫,对异色瓢虫的捕食功能无不良影响。HB310菌液短时间(72 h)或低浓度蛋白毒素粗提物(10.00μg/mL)的处理的桃蚜对异色瓢虫的各生育指标无显著影响,但一直取食HB310菌液处理的桃蚜对异色瓢虫的幼虫期、蛹重、成蛹率、羽化率和存活率有影响。而高浓度的蛋白毒素粗提物(100.00μg/mL)对异色瓢虫的蛹重、成蛹率有影响。取食HB310蛋白毒素粗提物饲喂的小菜蛾,异色瓢虫的各生育指标与对照无显著差别,但是,取食3.73×103 CFU/mL HB310菌液饲喂的小菜蛾的异色瓢虫化蛹率和15d的存活率显著低于对照。4.HB310菌液对家蚕的急性毒力很低,即使在处理后120h,仍然不能测定出其LC50。家蚕对嗜线虫致病杆菌HB310菌液和蛋白毒素粗提物均表现出一定的拒食性。家蚕5龄幼虫对2.24×106CFU/mL HB310原菌液和567.60μg/mL蛋白毒素粗提物的48 h拒食率分别达到24.90%和23.05%。HB310菌液及蛋白毒素粗提物对家蚕各龄幼虫体重均有明显的抑制作用,并且随龄期而增大。从蚁蚕开始一直饲喂含HB310原菌液人工饲料的幼虫各龄历期均明显延长,存活率显著下降,到4龄全部死亡。幼虫取食含原菌液人工饲料72 h后改饲喂正常饲料,1龄和2龄的历期明显长于对照,但以后各龄历期、化蛹率、羽化率、蛹重和茧层量等各项生物学指标均与对照无显著差异。1.12×104 CFU/mL HB310菌液和113.52μg/mL蛋白毒素粗提物对家蚕的生长发育无显著影响。综合分析认为,HB310菌株对家蚕毒性较低。5.甘蓝田喷施嗜线虫致病杆菌HB310菌液,其对小菜蛾的防效与(Bacillusthuringiensis,Bt)HD-1差异不显著。6月1日施药后6月6日调查,对小菜蛾防效分别为49.43±22.05%和59.24±20.05%。但嗜线虫致病杆菌HB310防治菜青虫的田间效果低于Bt HD-1,6月1日第3次喷药后,6月6日调查对菜青虫的防效HB310为52.10±2.33%,Bt HD-1为72.73±1.60%。与对照区相比,HB310防治区与Bt防治区的天敌数量、节肢动物种类丰富度和个体丰富度没有显著不同,即HB310菌在杀死甘蓝田害虫的同时对天敌有较明显的保护作用,对节肢动物群落的结构和多样性没有影响。
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