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研究背景:肺癌的发病率持续升高,肺癌分为非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)和小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)两种亚型,其中NSCLC的主要类型为肺腺癌(Lung adenocarcinoma,LAD),尽管近年来手术、放化疗等治疗方法不断更新,但是LAD患者的生存期仍然有限。因此积极寻找新的具有高灵敏度和特异性的诊断指标和新的治疗靶点尤其重要。随着全转录组测序的发展,发现了众多的长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lnc RNAs),并开始进行了功能注释。目前研究认为lnc RNA与人类癌症密切相关,其在癌症中的异常表达,具有重要的致病性后果。目的:本研究通过在临床组织标本分析linc00467的表达水平与LAD的相关性,进一步通过体外实验观察linc00467异常表达对LAD增殖、迁移和侵袭的影响,并探索其中的分子机制,为LAD的发病机制提供理论依据。方法:通过生物信息学方法分析得出linc00467在肺癌组织中异常表达。定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)技术验证了LAD组织及其配对的正常组织中linc00467的表达情况,并分析其表达水平与患者临床特征的相关性。之后我们选择了三株LAD的细胞系(A549,H1299,PC9)和一株人源正常支气管上皮细胞系(16HBE)进行了linc00467表达情况检测。在LAD细胞株中进行敲降和过表达linc00467,通过MTT和平板克隆形成实验观察细胞的增殖情况,通过流式细胞学实验验证细胞的凋亡,并用transwell实验观察肿瘤细胞的迁移和侵袭。在H1299细胞系中使用慢病毒(sh RNA)敲降linc00467,用RNA转录组测序找到下游潜在的靶基因HTRA3,通过RT-q PCR和western blot技术进一步验证了已被慢病毒敲降linc00467的A549细胞和H1299细胞中HTRA3的表达情况。通过生物信息学方法和RNA免疫共沉淀(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RIP)实验验证linc00467可以募集蛋白EZH2,染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)实验验证linc00467与EZH2结合后是否能够调控下游靶基因HTRA3。挽救实验验证HTRA3是否参与linc00467调控的LAD增殖、迁移和侵袭功能。最后使用RT-q PCR技术验证了LAD组织及其配对的正常组织中HTRA3的表达情况,并分析其表达水平与患者临床特征的相关性。结果:1.通过生物信息学分析GEO和TCGA数据库,发现linc00467在肺癌组织中的表达明显上调。对35例配对LAD组织分析,相对于配对正常肺组织,linc00467在LAD组织中表达上调,并且linc00467在肿瘤直径大于3cm的LAD组织和晚期LAD组织中的表达水平明显上调。2.在A549、H1299细胞中敲降linc00467后能明显抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进细胞的凋亡。在PC9中过表达linc00467后可明显促进细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并抑制细胞的凋亡。3.RNA转录组测序找到下游潜在的靶基因HTRA3,通过生物信息学方法预测linc00467可以募集蛋白EZH2,RIP实验进一步验证了linc00467可以与EZH2结合。Ch IP实验验证了EZH2可以富集到HTRA3的启动子区。结果表明,linc00467通过募集EZH2来调控HTRA3表达。挽救实验发现敲降HTRA3的表达能部分挽救敲降linc00467对LAD细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。4.对35例配对LAD组织分析,相对于配对正常肺组织,HTRA3在LAD组织中表达下调,并且HTRA3在肿瘤直径大于3cm的癌组织、有淋巴结转移和晚期LAD组织中的表达水平明显下调。结论:通过本研究表明,linc00467在LAD组织中的表达量明显高于正常组织,提示linc00467可能为潜在的LAD诊断分子标志物。首次在LAD细胞中证实linc00467可促进细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制其细胞凋亡,揭示了linc00467在LAD中发挥促癌基因的功能。其作用机制是linc00467募集到EZH2后通过负向调节HTRA3的表达促进LAD细胞的增殖、迁移和侵袭,这为阐明LAD分子机制提供了新的理论基础。