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研究目的:探讨组蛋白脱乙酰基酶抑制剂苯丁酸钠诱导人类白血病细胞系Kasumi-1生长抑制、分化和凋亡的基因表达谱改变和AML1、AML1-ETO对MDK基因转录的调节作用。 研究方法:应用流式细胞仪检测Kasumi-1细胞的CD11b、CD13分化抗原表达,Annexin V检测细胞凋亡,HgU95Av2基因表达谱芯片和半定量RT-PCR检测基因表达谱改变。从基因组DNA中PCR扩增一段含Runt结合顺序的MDK基因启动子/增强子序列(MDKp),定向克隆到pGL3-Basic质粒,构建MDKp-pGL3-Basic Luciferase报告基因表达载体;应用定点突变技术对表达载体MDKp上的Runt结合顺序进行突变,构建MDKp突变型表达载体(mu-MDKp-pGL3-Basic);将正常和突变型表达载体与AML1或AML1-ETO基因瞬时共转染293T细胞,分析/LML1、AML1-ETO对报告基因的转录调节作用。 结果:1、Kasumi-1细胞经苯丁酸钠3mM诱导72小时,CD11b和CD13分化抗原表达增多,早期和晚期凋亡细胞显著增加。基因表达谱芯片共发现280种基因表达发生改变,约占表达基因总量的2%。上调表达基因152个,下调表达基因128个;分别有89和52个基因表达上调或下调达2倍以上,其中MDK基因表达上调达25.7倍;AML1基因的表达也增高。表达改变的基因功能上