羊骨作为羊肉加工副产物具有很高的营养价值,但其生物活性物质还未被深入研究,因此本研究以羊骨为原料,通过优化酶解工艺制备羊骨抗氧化肽,对其抗氧化能力和稳定性进行分析,并表征其二级结构。进一步纯化多肽,对抗氧化能力最强的肽段进行氨基酸序列鉴定,通过功能注释、生物信息学预测筛选潜在的功能多肽。将筛选出的多肽进行化学合成,验证抗氧化活性,结果如下:羊骨氨基酸总含量为15.75 g/100g,其中疏水氨基酸占28.25%,必需氨基酸占20.44%,是抗氧化肽提取的理想原料。羊骨抗氧化肽响应面优化结果为:使用碱性蛋白酶,酶解p H 8.9、酶添加量6400 U/g、酶解时间3.25h、底物质量分数8.8%、酶解温度50℃,该条件下,水解度为（20.78±0.83）%,羊骨抗氧化肽的·OH清除能力、DPPH·清除能力、ABTS+自由基清除能力的IC50值分别为6.07 mg/m L、23.45 mg/m L、1.18 mg/m L,酶解物浓度为2 mg/m L时,测得还原力为0.15±0.003。羊骨抗氧化肽（SBAP）对高温不耐受,耐酸、碱性较弱;添加Na Cl可提高SBAP的还原力;还原糖使SBAP保持原有活性,或活性略有升高;而金属离子降低SBAP的抗氧化活性;SBAP活性对苯甲酸钠和山梨酸钾稳定;体外模拟消化表明,SBAP对人工胃肠液具有一定的惰性。结构表征显示,SBAP保留源蛋白的特征官能团,微观形貌呈疏松多孔的不规则大孔海绵状结构,α-螺旋结构和无规卷曲含量降低,β-折叠和β-转角含量升高。将最优工艺参数下制备的酶解液进行超滤分离,得到P-I（MW<3 k Da）、P-II（3 k Da<MW<10 k Da）和P-III（MW>10 k Da）。氨基酸测定结果表明:除谷氨酰胺/谷氨酸（Gln/Glu）,SBAP中其他氨基酸含量均高于羊骨粉,且必需氨基酸含量占总氨基酸的比值（EAA/TAA）为27.03%,疏水性氨基酸多达39.96%。P-I疏水性氨基酸所占比例最高,为43.13%,含有对疏水性组分有很强结合力的疏水性氨基酸（Pro、Phe、Met等）和非极性脂肪族氨基酸（Val）,且相同浓度条件下,P-I的·OH清除能力、DPPH·清除能力、ABTS+自由基清除能力和还原力活性最高。电镜图中直观地看出,P-I较其他肽段更加疏松,结构似絮状网络;体外模拟消化表明P-I表现出更高活性。对P-I进行LC-MS/MS质谱鉴定,Peptide Ranker评分大于0.85的肽段有17条,经GO和KEGG蛋白功能注释结果表明,酶解制备得到的多肽参与到生物系统、免疫系统、消化系统等多种生物过程中。结合文献报道以及功能预测网站对鉴定到的多肽进行筛选,确定合成VYPFPGPIPN、LGFPL和SLVYPFPGPIPN三条多肽。它们均具有抗氧化活性,但抗氧化活性存在差异,同时,合成肽间既存在正协同作用也存在负协同作用。