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【目的】
本实验通过采用2-AAF/PH(2-乙酰氨基芴灌胃+2/3肝切除)方法制作SD大鼠肝癌前病变模型，并给予山仙颗粒(SXG)灌胃，采用血液生化分析检测各组大鼠ALT、AST、GGT和AFP含量，HE染色法观察肝脏病理变化、免疫组织化学法观察肝组织内卵圆细胞标志物AFP、CD90以及Notch信号通路相关蛋白Notch1和HES1的表达,以阐明Notch信号通路对肝卵圆细胞增殖分化调控机制并进一步探讨山仙颗粒防治肝癌前病变恶性转化的机制。
【方法】
取SPF级雄性SD大鼠84只，体重约190±10克，随机分为空白组、假手术组、模型组和山仙颗粒高、中、低剂量组，每组14只，并编号。造模采用每日给予大鼠2-AAF溶液(20mg/kg)进行灌胃，连续4天。禁食12h后，在乙醚吸入麻醉下于第5天进行2/3肝大部切除。手术全程为无菌操作。手术当天不给予2-AAF灌胃，术后继续按20mg/kg的2-AAF溶液灌胃7天。空白组(10ml/kg生理盐水灌胃)、假手术组(2-AAF+假手术+10ml/kg生理盐水灌胃)、模型组(2-AAF+PHx+10ml/kg生理盐水灌胃)、山仙颗粒组(2-AAF+PHx+10ml/kg山仙颗粒灌胃)，每组从实验开始分别实施上述干预，按肝大部切除术后第25天处死实验动物。取肝脏组织，称重，观察并记录其大小、质地、外观等变化；取病变肝组织0.5cm×0.5cm×0.5cm两块，一块置入10%中性福尔马林固定，另一块置入-80℃冰箱，备用；腹主动脉取血，进行血液生化分析，检测各组大鼠肝功能相关酶ALT、AST、GGT及AFP的含量；HE染色光镜下观察各组大鼠肝组织病理形态变化；免疫组织化学法观察各组大鼠肝组织内卵圆细胞标志物AFP、CD90及Notch信号通路相关蛋白Notch1、HES1的表达变化。
【结果】
(1)山仙颗粒对2-AAF/PH大鼠肝癌前病变的影响。空白组：肉眼观肝脏表面光滑，颜色暗红。HE染色光镜下肝索结构正常。假手术组大鼠肝脏表面有少量小结节，光镜下正常肝索结构基本存在，偶见肝卵圆细胞增生。模型组：肉眼观肝脏质地较硬，表面有大量灰白色结节，光镜下可见肝细胞索结构排列紊乱，可见肝细胞水肿，汇管区可见大量肝卵圆细胞增生、炎细胞浸润；与模型组相比；山仙颗粒各组大鼠肝脏表面结节数量减少，体积减小。光镜下肝索破坏明显减轻，肝细胞水肿减轻，汇管区肝卵圆细胞数量减少，尤以大剂量山仙颗粒组减少明显。
(2)山仙颗粒对2-AAF/PH大鼠肝功能的影响。与空白组比较，假手术组大鼠ALT、AST、GGT差异不显著；与假手术组比较，模型组大鼠的肝功相关酶ALT、AST、GGT明显升高，且差异具有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较,高、中、低剂量山仙颗粒各组ALT、AST、GGT均下降,且差异显著(P＜0.05)，尤其以山仙颗粒高剂量组降低最显著(P＜0.01)。
(3)山仙颗粒对2-AAF/PH大鼠肝脏卵圆细胞标志物影响。免疫组化结果显示：与空白组比较，假手术组肝组织内AFP、CD90的表达差异不显著；与假手术组比较，模型组肝组织内AFP、CD90阳性细胞数目明显增多，且具有显著差异(P＜0.05)；与模型组比较，山仙颗粒高、中、低剂量组肝组织内AFP、CD90表达明显下降，且具有显著差异(P＜0.05)。
(4)山仙颗粒对2-AAF/PH大鼠肝脏组织内Notch信号通路相关蛋白HES1、Notch1表达的影响。免疫组化结果显示：与空白组比较，假手术组肝组织内HES1、Notch1的含量差异不显著；与假手术组比较，模型组大鼠肝组织内HES1、Notch1表达明显升高，且具有显著差异(P＜0.05)；与模型组比较，山仙颗粒高、中、低剂量组肝组织内HES1、Notch1表达明显下降，且具有显著差异(P＜0.05)。
【结论】
(1)山仙颗粒可改善2-AAF/PH诱导大鼠肝癌前病变，且具有剂量依赖性。
(2)山仙颗粒可降低2-AAF/PH诱导大鼠肝癌前病变血清ALT、AST、GGT含量，且具有剂量依赖性。
(3)山仙颗粒可通过下调AFP、CD90的表达而抑制2-AAF/PH诱导大鼠肝癌前病变肝脏组织中HOC的过度增殖和活化。
(4)山仙颗粒可下调2-AAF/PH诱导大鼠肝癌前病变肝脏组织中Notch信号通路相关蛋白HES1、Notch1的表达。
(5)肝癌前病变的发生发展与Notch信号通路过度激活密切相关；山仙颗粒可能通过干预HOC的增殖和活化，抑制其相关的Notch信号通路而阻断肝癌前病变的恶性转化。
本实验通过采用2-AAF/PH(2-乙酰氨基芴灌胃+2/3肝切除)方法制作SD大鼠肝癌前病变模型，并给予山仙颗粒(SXG)灌胃，采用血液生化分析检测各组大鼠ALT、AST、GGT和AFP含量，HE染色法观察肝脏病理变化、免疫组织化学法观察肝组织内卵圆细胞标志物AFP、CD90以及Notch信号通路相关蛋白Notch1和HES1的表达,以阐明Notch信号通路对肝卵圆细胞增殖分化调控机制并进一步探讨山仙颗粒防治肝癌前病变恶性转化的机制。
【方法】
取SPF级雄性SD大鼠84只，体重约190±10克，随机分为空白组、假手术组、模型组和山仙颗粒高、中、低剂量组，每组14只，并编号。造模采用每日给予大鼠2-AAF溶液(20mg/kg)进行灌胃，连续4天。禁食12h后，在乙醚吸入麻醉下于第5天进行2/3肝大部切除。手术全程为无菌操作。手术当天不给予2-AAF灌胃，术后继续按20mg/kg的2-AAF溶液灌胃7天。空白组(10ml/kg生理盐水灌胃)、假手术组(2-AAF+假手术+10ml/kg生理盐水灌胃)、模型组(2-AAF+PHx+10ml/kg生理盐水灌胃)、山仙颗粒组(2-AAF+PHx+10ml/kg山仙颗粒灌胃)，每组从实验开始分别实施上述干预，按肝大部切除术后第25天处死实验动物。取肝脏组织，称重，观察并记录其大小、质地、外观等变化；取病变肝组织0.5cm×0.5cm×0.5cm两块，一块置入10%中性福尔马林固定，另一块置入-80℃冰箱，备用；腹主动脉取血，进行血液生化分析，检测各组大鼠肝功能相关酶ALT、AST、GGT及AFP的含量；HE染色光镜下观察各组大鼠肝组织病理形态变化；免疫组织化学法观察各组大鼠肝组织内卵圆细胞标志物AFP、CD90及Notch信号通路相关蛋白Notch1、HES1的表达变化。
【结果】
(1)山仙颗粒对2-AAF/PH大鼠肝癌前病变的影响。空白组：肉眼观肝脏表面光滑，颜色暗红。HE染色光镜下肝索结构正常。假手术组大鼠肝脏表面有少量小结节，光镜下正常肝索结构基本存在，偶见肝卵圆细胞增生。模型组：肉眼观肝脏质地较硬，表面有大量灰白色结节，光镜下可见肝细胞索结构排列紊乱，可见肝细胞水肿，汇管区可见大量肝卵圆细胞增生、炎细胞浸润；与模型组相比；山仙颗粒各组大鼠肝脏表面结节数量减少，体积减小。光镜下肝索破坏明显减轻，肝细胞水肿减轻，汇管区肝卵圆细胞数量减少，尤以大剂量山仙颗粒组减少明显。
(2)山仙颗粒对2-AAF/PH大鼠肝功能的影响。与空白组比较，假手术组大鼠ALT、AST、GGT差异不显著；与假手术组比较，模型组大鼠的肝功相关酶ALT、AST、GGT明显升高，且差异具有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较,高、中、低剂量山仙颗粒各组ALT、AST、GGT均下降,且差异显著(P＜0.05)，尤其以山仙颗粒高剂量组降低最显著(P＜0.01)。
(3)山仙颗粒对2-AAF/PH大鼠肝脏卵圆细胞标志物影响。免疫组化结果显示：与空白组比较，假手术组肝组织内AFP、CD90的表达差异不显著；与假手术组比较，模型组肝组织内AFP、CD90阳性细胞数目明显增多，且具有显著差异(P＜0.05)；与模型组比较，山仙颗粒高、中、低剂量组肝组织内AFP、CD90表达明显下降，且具有显著差异(P＜0.05)。
(4)山仙颗粒对2-AAF/PH大鼠肝脏组织内Notch信号通路相关蛋白HES1、Notch1表达的影响。免疫组化结果显示：与空白组比较，假手术组肝组织内HES1、Notch1的含量差异不显著；与假手术组比较，模型组大鼠肝组织内HES1、Notch1表达明显升高，且具有显著差异(P＜0.05)；与模型组比较，山仙颗粒高、中、低剂量组肝组织内HES1、Notch1表达明显下降，且具有显著差异(P＜0.05)。
【结论】
(1)山仙颗粒可改善2-AAF/PH诱导大鼠肝癌前病变，且具有剂量依赖性。
(2)山仙颗粒可降低2-AAF/PH诱导大鼠肝癌前病变血清ALT、AST、GGT含量，且具有剂量依赖性。
(3)山仙颗粒可通过下调AFP、CD90的表达而抑制2-AAF/PH诱导大鼠肝癌前病变肝脏组织中HOC的过度增殖和活化。
(4)山仙颗粒可下调2-AAF/PH诱导大鼠肝癌前病变肝脏组织中Notch信号通路相关蛋白HES1、Notch1的表达。
(5)肝癌前病变的发生发展与Notch信号通路过度激活密切相关；山仙颗粒可能通过干预HOC的增殖和活化，抑制其相关的Notch信号通路而阻断肝癌前病变的恶性转化。