论文部分内容阅读
背景与目的:多发性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)是一种起源于浆细胞的恶性肿瘤，总体上MM仍然是一种不可治愈的疾病。研究显示1.0umol/L全反式维甲酸（ATRA）对RARα2+的骨髓瘤细胞及急性非淋巴细胞白血病（AML）细胞有促凋亡作用，1000U/mL粒细胞集落刺激因子(G-CSF)能促进AML细胞RARα2+表达增加并与ATRA有协同促凋亡作用。但两药联合对之MM方面的研究国内外目前研究较少。本研究通过观察G-CSF与ATRA对骨髓瘤细胞的生长、调亡和分化的影响，检测骨髓瘤细胞株及原代骨髓瘤细胞RARα2的表达情况，探讨两者的关系，从而为寻找更多有效的多发性骨髓瘤治疗药物提供实验依据。 方法:人骨髓瘤细胞RARα2+细胞株(OPM2)，RARα2-细胞株(U266)以G-CSF(1000U/mL、2000U/mL)、ATRA(1.0umol/L)干预后，采用MTT法检测细胞活力变化;倒置显微镜动态观察细胞凋亡过程;Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡的变化;用半定量RT-PCR方法检测RARα2mRNA表达变化。用瑞氏-姬母萨染色观察细胞形态学变化;流式细胞学分析CD49e表达变化。采用淋巴细胞分离液分离26例MM患者骨髓中单个核细胞，用半定量RT-PCR方法检测所有标本RARα2mRNA表达情况。 结果:在48h时2000U/mLG-CSF、1.0umol/LATRA单药及联合用药对OPM2细胞的活力分别为对照组的100.75％、89.77％、86.41％;而相应于对U266细胞的活力分别为对照组的94.21％、96.73％、96.06％。在48h时ATRA可抑制OPM2细胞的生长(P＜0.05)，G-CSF单药组的生长抑制率＜0，联合用药组生长抑制率分别为12.52％、13.59％，均大于两单药抑制率(p＜0.05)。而在U266细胞的这种作用不明显(P＞0.1)。倒置显微镜下可见到明显细胞形态学变化。2000U/mLG-CSF+1.0umol/LATRA在培养24h后可诱导(8.1±2.0)％的OPM2细胞和(4.5±1.4)％的U266细胞发生凋亡;培养48h后可诱导(11.6±2.4)％的OPM2细胞和(7.5±3.7)％的U266细胞发生凋亡。OPM2细胞RARα2mRNA表达水平:G-CSF与ATRA联合组及ATRA单药组均较对照组增加(P＜0.05);G-CSF与ATRA联合组均较ATRA单药组增加(P＜0.05);对照组与各G-CSF单药组表达无明显差异(P＞0.05)。U266细胞RARα2mRNA表达水平:溶媒对照组、G-CSF单药组几乎不表达;ATRA单药组及2000U/mLG-CSF+1.0ummol/LATRA联合组呈弱表达。瑞氏-姬母萨染色显示在含ATRA的试验组，OPM2细胞有细胞核缩小、染色质聚集浓缩、核仁数量减少、胞浆量增加并呈深蓝色改变。OPM2细胞表面CD49e的表达率在2000U/mLG-CSF+1.0umol/LATRA联合组与对照组分别为(5.1±0.23)％和(2.4±0.47)％。26例患者中部分RARα2表达阳性，其中18例初治患者阳性表达10例（占55.6％），8例复治患者阳性表达4例（占50.0％）。 结论:ATRA对RARα2+的骨髓瘤细胞有抑制细胞增殖作用。ATRA能促进骨髓瘤细胞RARα2表达，G-CSF对这种促进作用有协同效应;单独G-CSF无明显上述作用。ATRA对RARα2+骨髓瘤细胞的分化也有一定促进作用。临床病例中部分MM患者可检测到RARα2表达。