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目的：本文检测化学致癌物二亚硝基哌嗪(N,N’-Dinitrosopiperazine, DNP)处理鼻咽癌细胞(6-10B)后的运动侵袭能力,分析DNP对Ezrin和phos-Ezrin (phosphorylated ezrin, phos-Ezrin)表达的调控作用,探讨DNP参与鼻咽癌侵袭转移的分子机制。方法：1.鼻咽癌细胞6-10B为低转移、低成瘤鼻咽癌细胞系,来自鼻咽癌母细胞系SUNE-1,作为研究材料。来自同一母细胞系的5-8F,为高转移、高成瘤鼻咽癌细胞株,作为对照细胞。2.连续稀释法制备不同浓度DNP,将不同浓度DNP处理6-10B细胞,四甲基偶氮唑蓝(Methylthiazolyltertrazolium, MTT)实验分析DNP处理6-10B细胞的非毒性浓度(non-cytotoxic concentration,NCC)。全自动生化仪检测DNP处理6-10B细胞培养液乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenas, LDH),进一步确证DNP非毒性浓度。3.用DNP非毒性浓度处理6-10B细胞,Western Blotting分析DNP处理6-10B细胞后Ezrin和phos-Ezrin Thr567表达的影响。明确DNP是否诱导6-10B细胞Ezrin或phos-Ezrin Thr567表达。4.用DNP非毒性浓度处理6-10B细胞,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验分析非毒性浓度的DNP对6-10B细胞迁移运动和侵袭能力的影响。明确DNP是否促进6-10B细胞运动迁移和侵袭。5.通过尾静脉将6-10B细胞移植在BALB/c裸小鼠体内,皮下注射DNP,处理一定时间后,解剖裸鼠,观察6-10B细胞转移情况,常规病理学检测,确认6-10B细胞是否发生转移。分析DNP在体内对鼻咽癌细胞成瘤和转移的影响。6.将6-10B转移癌组织病理切片,免疫组化SP方法检测Ezrin和phos-Ezrin Thr567在裸鼠组织中的表达,分析DNP在体内对6-10B细胞Ezrin和phos-Ezrin Thr567表达的影响。7.利用SPSS17.0统计软件分析数据。结果：1.MTT实验和LDH检测结果显示,DNP在高浓度(100μ.mol/L以上)时对鼻咽癌6-10B细胞生长增殖有明显的抑制作用(P<0.05),而在0～100μmol/L时对6-10B细胞的生长没有明显影响(P>0.05)。DNP处理6-10B细胞的非毒性浓度为0～100μmol/L。2. Western Blotting分析DNP诱导Ezrin和phos-Ezrin Thr567表达,结果显示不同浓度DNP处理6-10B细胞组和未处理组Ezrin的表达无明显差异(P>0.05)；而DNP处理6-10B细胞phos-EzrinThr567表达水平明显高于未处理6-10B细胞(P<0.05),且随剂量增加和处理时间延长phos-EzrinThr567逐步增高,呈现明显的处理剂量依赖性和时间依赖性。3.划痕实验结果显示,DNP处理组迁移生长细胞数明显多未处理组；Transwell迁移和侵袭实验结果表明,DNP处理组穿过过滤膜细胞数显著多于未处理组(P<0.05),这说明DNP能增强鼻咽癌6-10B细胞迁移和侵袭能力。4.6-10B细胞移植在BALB/c裸小鼠体内,DNP处理一定时间后,在裸鼠肺组织观察到瘤组织,常规病理检查证实为鼻咽癌细胞肺转移瘤,表明DNP促进6-10B细胞肺转移。5.转移癌组织免疫组化结果显示,DNP处理组裸鼠肺转移灶phos-EzrinThr567的表达明显高于对照组(P<0.05),总Ezrin蛋白表达无明显差异。提示DNP通过上调phos-EzrinThr567表达促进鼻咽癌6-10B细胞转移。结论：1.DNP诱导鼻咽癌6-10B细胞phos-EzrinThr567表达,呈现明显的剂量和时间依赖性,但总Ezrin的表达无明显变化。2.DNP促进鼻咽癌6-10B细胞迁移运动和侵袭能力,DNP可能参与了鼻咽癌侵袭转移。3.DNP促进鼻咽癌6-10B细胞裸鼠肺转移,上调转移组织phos-EzrinThr567的表达,提示DNP可能通过上调phos-EzrinThr567表达促进鼻咽癌细胞侵袭与转移：