【摘 要】
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目的:用含有LIM矿化蛋白1(LMP-1)基因的逆转录病毒载体(RV-LMP-1-GFP)转染骨质疏松性SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测其对骨质疏松性骨髓间充质干细胞LIM矿化蛋白表达的影响。方
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目的:用含有LIM矿化蛋白1(LMP-1)基因的逆转录病毒载体(RV-LMP-1-GFP)转染骨质疏松性SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测其对骨质疏松性骨髓间充质干细胞LIM矿化蛋白表达的影响。方法:取4月龄雌性SD大鼠18只(山西医科大学实验动物中心提供),其中12只采用双侧卵巢切除法后喂养2月,无菌条件下取双侧股骨、胫骨、肱骨分离培养其骨髓间充质干细胞,均培养至3代,随机分为去势组和LMP-1转染组,其中LMP-1转染组骨髓间充质干细胞转染LMP-1基因;其余6只去除卵巢周围等量脂肪组织后喂养2月,采用同样方法分离培养细胞至3代,为假手术组。3组均为6月龄大鼠提取的BMSCs,分别行RT-PCR及Western-Blot检测LIM矿化蛋白1基因的表达,分析LMP-1基因对骨质疏松性大鼠BMSCs的作用。结果:培养出骨质疏松性SD大鼠骨髓间充质干细胞,转染后倒置荧光显微镜下可见绿色荧光表达;3组细胞均可在基因及蛋白水平表达LIM矿化蛋白1。与假手术组及OVX组比较, LMP-1基因转染组的mRNA和蛋白的表达均升高显著(P<0.05),Sham组与OVX组之间无明显差异(P>0.05);成功实现重组RV-LMP-1-GFP基因在骨质疏松性SD大鼠骨髓间充质干细胞中mRNA和蛋白水平的表达,且LMP-1的表达水平显著提高。结论:重组LMP-1基因成功导入骨质疏松性大鼠BMSCs基因组中,并使得LMP-1的mRNA和蛋白的表达明显提高。
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