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6型埃柯病毒相关IgM天然抗体（Echo viruse-06 associated IgM nature antibody 6,E06）是一种抗氧化磷脂胆碱单克隆自身抗体。现有文献表明E06与动脉粥样硬化（atherosclerosis,As）发生发展密切相关,但其潜在机制尚不明确。增强泡沫细胞胆固醇流出以及机体胆固醇逆向转运（Reverse Cholesterol Transport,RCT）是减缓As发生发展的策略之一。ABCA1,即ATP结合盒式转运体A1（ATP-Binding Cassette Transporter A1）可以将细胞内胆固醇流出至细胞外,进行胆固醇逆向转运。本文首先从临床出发,调查E06与冠心病的关系,发现冠心病患者体内E06水平降低,与HDL-C水平呈正相关;然后,通过细胞及动脉粥样硬化模型小鼠等实验探究E06对巨噬细胞ABCA1的表达以及As发生发展的影响及其机制,发现E06能够通过miR-203a-3p/GLI锌指蛋白家族蛋白3（GLI Family Zinc Finger 3,Gli3）途径上调巨噬细胞ABCA1表达,促进胆固醇流出,增加RCT,发挥抗As的作用。该文的完成有望为As防治提供新的治疗策略。第一章冠心病患者血浆中E06水平的变化目的:检测冠心病（Coronary Heart Disease,CHD）患者和对照组（非冠心病患者）血浆中E06水平,探讨E06与CHD以及严重程度之间的关系,并进一步分析人群E06与HDL-C的相关性。方法:选取的研究对象为南华大学附一医院心内科进行冠脉造影（Coronary Angiography,CAG）检查的204例患者。通过Gensini评分,评价冠脉狭窄程度,其积分越高,反应As病变越严重。根据Gensini评分结果我们将研究对象分成4组,即对照组（Gensini=0）,冠状动脉无狭窄;低危组（1<Gensini≤20）,冠脉轻度狭窄;中危组（20<Gensini≤40）,冠脉中度狭窄;高危组（40<Gensini≤160）,冠脉重度狭窄。采集并分离患者的血浆,用于检测E06及HDL-C的水平,明确E06与AS病变的相关性以及E06与HDL-C是否存在相关性。结果:各组患者的一般情况（性别、年龄、吸烟、高血压病等）以及检测结果(单核细胞、白细胞（white blood cell,WBC）、肌酐（creatinine,Cr）、尿素氮（urea nitrogen,BUN）、谷草转氨酶（glutamic oxaloacetic transaminase,AST）、谷丙转氨酶（Alanine transaminase,ALT）等均未见明显差异。各组血浆E06浓度分别为:Control组（29.63±5.82）μg/ml,低危组（24.85±3.59）μg/ml,中危组（20.89±3.73）μg/ml,高危组（16.80±4.81）μg/ml,即3组冠脉狭窄患者E06浓度随着冠状动脉狭窄程度的增加而呈现下降的趋势,说明冠状动脉病变严重程度与E06浓度成反比。随后,分析E06浓度与HDL-C的相关性,发现机体内E06浓度与HDL-C浓度呈正相关（r=0.5433,P<0.001）小结:（1）CHD患者血浆中E06浓度显著下降;（2）E06浓度与HDL-C水平呈正相关。第二章E06通过miR-203a-3p/Gli3途径调控巨噬细胞ABCA1表达及胆固醇流出目的:探究E06对泡沫细胞脂质蓄积和ABCA1介导胆固醇流出的影响,同时探讨E06是否能够调控ABCA1表达及其潜在机制。方法:采用THP-1单核细胞建立泡沫细胞模型。设置E06浓度梯度处理THP-1源性泡沫细胞不同时间,油红O染色观察泡沫细胞内脂质蓄积情况,高效液相色谱法分析泡沫细胞内胆固醇的含量,蛋白质免疫印迹（Western blot,WB）和实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）检测ABCA1表达,液体闪烁计数仪分析胆固醇流出情况;生物信息学预测GLI锌指蛋白家族蛋白3（GLI Family Zinc Finger 3,Gli3）与ABCA1启动子区域的结合位点;荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation,Chip）进一步分析Gli3与ABCA1启动子结合情况。小干扰RNA（Small interfering RNA,si RNA）敲低Gli3表达后,E06对细胞进行处理,q RT-PCR和WB检测ABCA1表达。通过生物信息学网站分析并筛选,靶向调控Gli3的miRNAs,并通过荧光素酶报告基因检验其结合情况。采用miR-203a-3p mimic或inhibitor与THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞共孵育,观察细胞内Gli3及ABCA1的表达及胆固醇流出情况。使用E06处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞后,检测miR-203a-3p的表达,观察E06对miR-203a-3p的影响;将E06与miR-203a-3p mimic共处理THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞,检测Gli3及ABCA1的表达及胆固醇流出情况。结果:E06促进THP-1源性泡沫细胞ABCA1表达,增加胆固醇流出,减少细胞内脂质蓄积。生物信息学网站分析发现,ABCA1启动子区域存在与Gli3结合的三个位点,即（-73,-60）,（-656,-642）,（-1361,-1352）。荧光素酶报告基因和Ch IP进一步证实,Gli3与ABCA1启动子区域存在（-73,-60）,（-1361,-1352）两个结合位点,且E06能够通过促进Gli3与ABCA1启动子结合并上调ABCA1表达。生物信息学网站分析显示Gli3的3’UTR与miR-203a-3p存在结合位点;荧光素酶报告基因实验发现miR-203a-3p可以与Gli3直接作用;miR-203a-3p mimic下调Gli3及ABCA1表达,抑制巨噬细胞胆固醇流出;而抑制miR-203a-3p则结果相反。E06处理的THP-1巨噬细胞中miR-203a-3p表达水平降低。在E06处理的THP-1巨噬细胞中同时加入miR-203a-3p mimic后,与E06处理组相比,E06增加Gli3、ABCA1表达的能力被限制。小结:（1）E06促进巨噬细胞ABCA1表达,增加胆固醇流出,抑制巨噬细胞脂质蓄积;（2）E06通过miR-203a-3p/Gli3途径上调巨噬细胞ABCA1表达。第三章E06对LDLR-/-小鼠As的影响及机制目的:整体水平上探究E06对LDLR-/-小鼠血脂水平,RCT效率和As斑块面积的影响以及体内E06对miR-203a-3p、Gli3和ABCA1表达及其胆固醇流出影响。方法:以LDLR-/-小鼠作为As的动物模型,40只8周龄雄性LDLR-/-小鼠适应性喂养1周后随机分为2组,每组20只,分别为E06组,即腹腔注射20 mg/kg E06组,以及腹腔内注射等浓度生理盐水的小鼠作为对照组,每3天注射一次至处死前1天。给予高脂饮食喂养并连续处理12周,饲养期间每2周小鼠称重一次。在12周完成各项检测后处死。酶氧化法检测血浆TC、TG和HDL-C水平、肝功能及肾功能。通过[3H]标记胆固醇检测小鼠体内RCT效率。小鼠处死后,剥离主动脉弓,体视显微镜下观察主动脉中的斑块。使用油红O与HE等染色观察小鼠主动脉窦和主动脉As斑块。使用q RT-PCR和WB检测小鼠主动脉组织与腹腔巨噬细胞中miR-203a-3p、Gli3和ABCA1的表达情况。结果:E06处理后不影响LDLR-/-小鼠体重、肝肾等功能。E06处理组小鼠主动脉弓斑块,主动脉窦的斑块面积及其动脉壁脂质沉积均显著降低,在动物体内证实E06可以抑制As的发展。同时,E06处理的小鼠,HDL-C水平增加,RCT效率也显著升高,说明E06能通过增强RCT效率,降低As发生发展。此外,E06能降低LDLR-/-小鼠血浆、主动脉以及腹腔巨噬细胞中miR-203a-3p水平,促进Gli3和ABCA1的表达,说明体内E06也能通过miR-203a-3p/Gli3途径上调ABCA1表达。小结:（1）E06上调LDLR-/-小鼠ABCA1的水平,增加血浆中HDL-C水平,加速RCT过程,抑制As发生发展。（2）E06通过miR-203a-3p/Gli3途径上调LDL-/-小鼠中ABCA1表达。结论1.E06在冠心病患者血浆中水平显著降低,并与HDL-C水平呈正相关;2.E06通过mi R-203a-3p/Gli3途径促进泡沫细胞ABCA1表达,增加胆固醇流出,减少脂质蓄积;3.E06增加LDLR-/-小鼠ABCA1表达,增加血浆HDL-C水平,加速胆固醇逆向转运过程,抑制动脉粥样硬化病变。