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国内外学者对支原体的研究超过60多年，但至今对支原体病的控制，尤其鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum，MG)感染的控制，仍然是现代集约化养禽业的重点。MG细胞膜表面存在多种黏附蛋白，参与支原体定植和侵袭宿主细胞，其中PvpA蛋白是存在于MG细胞膜表面、能够被鸡的免疫系统识别的高频变异蛋白和特异性蛋白，其通过变异使病原逃避宿主的免疫防御而持续存在于感染鸡群。因此，探讨我国临床分离鸡毒支原体编码黏附素蛋白pvpA基因的分子特征，阐明PvpA蛋白变异特征及其免疫原性，为进一步了解鸡毒支原体致病机制、建立新的鉴别诊断方法奠定基础。
本研究通过对MG pvpA基因扩增条件的摸索和优化，建立巢式PCR法，对来自广东、四川和北京的41株临床分离的鸡毒支原体和4株参考株pvpA基因进行扩增并测序，分析我国临床分离株pvpA基因变异特征；同时，利用基因重组技术将pvpA基因的PCR扩增产物与原核表达载体pET-41a(+)连接，转化入DH5a感受态细胞，通过PCR、双酶切及测序鉴定后，将阳性重组质粒转化入大肠杆菌BL21(D3)受体菌，经IPTG诱导蛋白表达。纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔，制备PvpA蛋白多克隆抗血清；用SDS-PAGE和Western blot对纯化蛋白进行分析和检测。
结果表明，所有临床分离株pvpA基因分子特征与强毒株S6一致，与疫苗株F36完全不同。临床分离株pvpA基因C-末端DR-1、DR-2区域(第670位～第1056位)GC的含量为53.52％，明显高于鸡毒支原体的平均GC含量；与R株相比，所有临床分离株及S6、BG44T在DR-1和DR-2之间丢失60个碱基；该区域富含脯氨酸，高达30.27％；重复四肽Pro-Arg-Pro-X共出现10次，X为甲硫氨酸6次、甘氨酸1次、天冬酰胺1次、谷氨酰胺2次。而疫苗株F36 PvpA只有DR-1区域，间隔25肽缺失了24个肽，DR-2区域全部丢失。另外，本文成功构建了pET-PvpA原核表达载体，经大肠杆菌中诱导表达和镍亲和层析柱纯化，得到较纯的相对分子质量约18 kD的融合蛋白，免疫新西兰大白兔后得到多抗血清，Western blot结果显示多克隆抗体能与PvpA蛋白特异性结合，并建立间接ELISA法测定PvpA抗血清效价。
本实验建立的巢式PCR法扩增pvpA基因重复性好、特异性强，可以将pvpA基因作为靶标用以临床鸡毒支原体流行调查；临床分离株pvpA基因变异特征与强毒株S6一致，与疫苗株F36的变异特征有显著差异；获得的PvpA纯化蛋白具有良好的免疫原性，为建立新的鉴别诊断方法奠定基础。