【摘 要】
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目的:探究糖尿病环境下内皮祖细胞（EPCs）受损的血管生成功能是否可以通过TGF-β1/CXCR7信号轴的上调得到改善,为糖尿病慢性创面血管化障碍的研究提供新的理论依据和实验基础。方法:（1）构建C57BL/6小鼠糖尿病创面模型,观察TGF-β1对创面愈合的影响并验证糖尿病创面TGF-β1表达降低;（2）HE染色观察TGF-β1对创面血管生成的影响;（3）采用免疫荧光染色观察TGF-β1对创面愈合
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目的:探究糖尿病环境下内皮祖细胞（EPCs）受损的血管生成功能是否可以通过TGF-β1/CXCR7信号轴的上调得到改善,为糖尿病慢性创面血管化障碍的研究提供新的理论依据和实验基础。方法:（1）构建C57BL/6小鼠糖尿病创面模型,观察TGF-β1对创面愈合的影响并验证糖尿病创面TGF-β1表达降低;（2）HE染色观察TGF-β1对创面血管生成的影响;（3）采用免疫荧光染色观察TGF-β1对创面愈合过程EPCs数量的影响;（4）通过密度梯度离心法提取C57BL/6小鼠骨髓EPCs,并通过流式细胞术及分化实验鉴定;（5）制作高糖环境和慢病毒转染的方法分别获得CXCR7下调的EPCs,再通过Western Blot法验证CXCR7下调效果;（6）通过Ed U细胞增殖实验检测TGF-β1对CXCR7下调的EPCs增殖能力的影响;（7）通过划痕实验和Transwell法检测TGF-β1对CXCR7下调的EPCs迁移能力的影响;（8）通过小管形成实验检测TGF-β1对CXCR7下调的EPCs成管能力的影响;（9）通过RT-PCR实验检测TGF-β1对CXCR7下调的EPCs内CXCR7的m RNA表达变化;（10）通过Western Blot法检测TGF-β1对CXCR7下调的EPCs内CXCR7的蛋白表达变化。结果:（1）成功构建C57BL/6小鼠糖尿病创面模型,观察到TGF-β1治疗组的糖尿病创面愈合速度更快,并验证糖尿病创面TGF-β1表达降低;（2）通过创面皮肤组织石蜡切片HE染色发现添加TGF-β1的糖尿病创面血管密度更高;（3）创面皮肤组织石蜡切片的免疫荧光染色结果显示添加TGF-β1的糖尿病创面EPCs数量更多;（4）通过密度梯度离心法成功从C57BL/6小鼠骨髓中分离、纯化出EPCs,经流式鉴定具有间充质干细胞表型,且可向内皮细胞分化;（5）向细胞培养基内添加葡萄糖和慢病毒转染分别成功获得CXCR7下调的EPCs,慢病毒转染法最佳MOI:50;（6）高糖环境降低了EPCs的细胞增殖、迁移和成管能力,添加TGF-β1可部分恢复EPCs的增殖和成管能力,然而对迁移能力没有明显影响;（7）sh CXCR7慢病毒转染降低了EPCs的细胞增殖和成管能力,对迁移能力没有明显影响;（8）高糖环境降低了EPCs内CXCR7的m RNA和蛋白表达,添加TGF-β1可部分逆转该抑制效果。结论:（1）TGF-β1可以增加糖尿病创面局部EPCs的数量,促进血管生成,并最终加速糖尿病创面的愈合。（2）密度梯度离心法可以成功从骨髓中分离出EPCs,在体外可稳定培养增殖,其具有干细胞和内皮细胞的表型,可定向分化成内皮细胞以及形成小管的能力。（3）TGF-β1可以部分恢复在高糖环境内EPCs受到抑制的增殖和成管能力。（4）TGF-β1可以部分恢复糖尿病EPCs内表达下调的CXCR7。
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