新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是一种长期以来一直威胁养禽业发展的禽类病毒。新城疫病毒基因组编码6种结构蛋白。其中基质蛋白(Matrix protein,M)为非糖蛋白,参与构成新城疫病毒的囊膜,部分位于囊膜内,其余部分与核衣壳相邻,共同组成病毒囊膜的骨架。NDVM蛋白在病毒的组装、出芽以及释放过程中都发挥着重要作用,且M蛋白转染后具有入核现象,但无法确认M蛋白在NDV感染时的核定位状态,其入核的生物学意义尚不明确。1、新城疫病毒M蛋白生物信息学分析:本研究对新城疫病毒M蛋白进行了生物信息学分析,包括对B细胞抗原表位、T细胞表位、二级结构、3D表面展示等,综合分析数据选择M蛋白第42～56位氨基酸作为抗原合成序列。2、新城疫病毒M蛋白单克隆抗体制备:经过表位分析后,选择M蛋白寡肽序列进行人工合成,偶联KLH后,与弗氏完全佐剂混合乳化后以50μg/只与弗氏完全佐剂混匀皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,间隔两周用弗氏不完全佐剂乳化抗原进行第二次和第三次免疫,第四次免疫按100μg/只纯水稀释抗原腹腔注射免疫,4天后将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,以NDV感染96孔板培养的HeLa细胞作为检测抗原对融合细胞上清进行间接免疫荧光试验(IFA)检测,阳性杂交瘤细胞进行3-4次克隆纯化,扩大培养后冻存,最终获得一株新城疫病毒M蛋白单克隆抗体(Mab)。对该Mab进行特异性试验表明,其能识别NDV不同毒株的M蛋白。3、M蛋白核定位研究:利用该Mab检测了新城疫病毒感染细胞后M蛋白在细胞内的时相变化,发现病毒感染产生的M蛋白主要分布核周细胞质以及在核内呈点状聚集分布;并与具有核定位信号(NLS)序列的M质粒和敲除NLS序列的M质粒转染细胞后的M蛋白胞内分布变化结果进行比较,发现M蛋白入核依赖自身NLS序列。本研究制备出一株稳定分泌抗M蛋白单克隆抗体细胞株。研究发现病毒感染产生的M蛋白分布于核周以及核内呈点状分布,并且M蛋白入核依赖于自身的NLS序列。此发现为今后深入研究NDV M入核作用提供了基础。