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本文以一株能在胞外大量积累丙酮酸的光滑球拟酵母（Torulopsis glabrata）四重维生素（硫胺素、生物素、吡哆醇和烟酸）的营养缺陷型菌株CCTCC M202019为研究菌株。以丙酮酸高效生产为目标,在充分了解光滑球拟酵母中能量和碳代谢途径的基础上利用生物化学和菌种选育的理论和方法,就调控糖酵解效率和丙酮酸合成的关键因素及其作用机理开展研究。主要研究结果如下:1.利用氧化磷酸化抑制剂（鱼藤酮、抗霉素A和寡霉素）和菌种诱变从内外源两个方面研究降低胞内能荷水平对酵解途径的影响及调控机理。添加外源抑制剂显著降低了胞内ATP水平,提高了糖酵解关键酶磷酸果糖激酶（PFK）活性,进而提高T. glabrata葡萄糖消耗速度和丙酮酸生产速度。改变胞内ATP水平并不影响糖酵解途径其他关键酶己糖激酶（HK）、丙酮酸激酶（PK）活性。在氧化磷酸化途径中,F0F1-ATPase在ATP合成中起着关键性的作用。利用菌种选育技术获得F0F1-ATPase活性降低65%的突变株N07。添加F0F1-ATPase抑制剂双环己基碳二亚胺（DCCD）、叠氮钠（NaN3）、新霉素并不降低突变株N07的F0F1-ATPase活性。F0F1-ATPase活性的降低提高了底物水平磷酸化途径（酵解途径）关键酶的活性。与出发菌株比较,N07菌的葡萄糖消耗速度和丙酮酸生产速度分别提高了34%和42.9%,发酵周期缩短12 h;2.综合外源抑制剂和内源突变对T. glabrata能量代谢和酵解的影响,发现:降低胞内ATP含量能显著提高PFK活性（R2=0.9971）和葡萄糖消耗速度（R2=0.9967）以及丙酮酸生产速度（R2=0.965）,葡萄糖消耗速度的增加是糖酵解途径中关键酶PFK活性（R2=0.9958）和PK活性（R2=0.8706）增加所导致的。这一结果从能量代谢流、碳代谢流和关键酶活性等三方面揭示了真核微生物细胞中氧化磷酸化途径与中心代谢途径（酵解）的定量关系;3利用高溶氧条件下阻断电子传递链和低溶氧下提高乙醇脱氢酶活性的方法,研究改变T. glabrata中NADH氧化途径对能量代谢和酵解途径的影响。在摇瓶中增加培养基中NAD+前体物质--烟酸（NA）的浓度促进了葡萄糖消耗速度（2.01 g/（L h））和丙酮酸产量（46.4 g/L）的提高。T. glabrata CCTCC M 202019经溴化乙锭（EtBr）处理后获得F0F1-ATPase、复合体I、复合体I+III、复合体II+III、复合体IV活性下降22.2%、41.6%、53.1%、23.6%和84.7%的呼吸缺陷型突变株RD-18,在细胞生长对数期流加2.1 mmol/L外源电子受体乙醛使呼吸缺陷型突变株RD-18单位细胞消耗葡萄糖和生产丙酮酸的能力分别提高了15.4%