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背景和目的目前临床上在脂质代谢紊乱方面的治疗还主要集中在降低血浆低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)水平方面。降低LDL-C水平减少罹患心血管疾病风险的观点已经得到广泛认同。然而临床结果显示经过他汀类药物标准治疗后即使LDL-C达标,仍有10.9%的心血管剩留风险。治疗新靶点研究(TNT)显示,经过他汀类药物强化治疗后即使LDL-C水平降至1.99mmol/L,明显低于达标水平,仍有8.7%的绝对冠状动脉事件剩留风险,提示即使经过他汀类药物强化治疗,冠状动脉事件剩留风险仍较高。血脂异常相关的心血管剩留风险与多种因素有关,以低高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)为特征的血脂异常是经过他汀类药物治疗降低LDL-C水平后最常见的其中一种。如何降低冠状动脉事件剩留风险,减少心血管事件发生率,也是目前研究的焦点之一。HDL-C水平与心血管发生率呈负相关,约有1/3的血脂异常患者通过提高HDL-C水平而受益,有研究表明血浆HDL-C每升高0.03mmol/L(1.0mg/dl)就可以使罹患心血管疾病的风险下降2%-4%。另外LDL-C/HDL-C比值也是一个与心血管事件密切相关而独立于LDL-C和HDL-C的重要指标。因此治疗动脉粥样硬化除了在一定范围内降低LDL-C水平之外如何有效的提高HDL-C水平就成为了重要的研究方向。内皮脂酶(endothelial lipase, EL)是近年新发现的甘油三酯脂肪酶家族新成员,直接由血管内皮细胞分泌,在局部发挥作用。主要具有磷脂酶活性,是代谢HDL-C的关键酶,如何能够通过减低或抑制EL活性,从而减少HDL-C的降解,是治疗动脉粥样硬化的新发展思路。因此研究EL的转录表达调节,如何有效的降低EL就显得极为迫切。血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)和炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)是两种非常重要的致动脉粥样硬化危险因素。Ang Ⅱ能通过增加巨噬细胞清道夫受体CD36,促进巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL),加速泡沫细胞形成；能通过诱导炎症反应及细胞凋亡、产生氧自由基和影响纤溶功能等多方面参与动脉粥样硬化的病理过程;可以增加斑块不稳定因子[7]EMMPRIN和MMPs[8、9]的表达,加重动脉粥样硬化病变。IL-6也是一种重要的致动脉粥样硬化炎症因子,它构成了许多急慢性疾病的病理学基础,能够损伤内皮细胞造成内皮细胞功能障碍,增加单核-内皮细胞的粘附,还可以促进巨噬细胞对脂质的摄取。核因子NF-κB是种重要的核转录调节因子,激活后可启动包括细胞因子、化学因子等多种效应基因的表达。丝裂原活化蛋白激酶MAPKs级联反应是细胞内重要的信号传导系统之一,参与多种胞内信息传递过程,能对广泛的细胞外刺激发生反应,研究表明,NF-κB和p38MAPK在动脉粥样硬化中表达增加，可能是各种危险因子诱发动脉粥样硬化的机制之一,NF-κB和p38MAPK信号传导途径可能在EL的转录表达过程中发挥作用。本课题通过体外培养人脐静脉内皮细胞,以IL-6和Ang Ⅱ刺激内皮细胞,观察IL-6、Ang Ⅱ、NF-κB p65阻断剂PDTC (Pyrrolidinedithioearbamic acid)和SB203580(p38MAPK抑制剂)对EL表达的影响,验证IL-6和AngⅡ是否通过NF-κB和MAPK信号传导途径调节EL的表达。研究方法1.提取新生儿脐静脉内皮细胞进行原代培养,经鉴定为内皮细胞后,贴壁法传代培养。第四代细胞用于实验。2.用于实验的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells.HUVKCs)共分六组①AngⅡ刺激组：在培养液中加入AngⅡ,使之终浓度为10umol/L;②四氢化吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)+AngⅡ刺激组,在培养液中加入PDTC使之终浓度为10mmol/L,预处理1h后加入AngⅡ (10umol/L)刺激;③SB203580+AngⅡ (10umol/L)刺激组,在培养液中加入SB203580使之终浓度为10imol/L,预处理1h后加入AngⅡ(10umol/L)刺激；④IL-6刺激组：在培养液中加入rhIL-6,使之终浓度为10ng/mL,预处理1h后加入AngⅡ(10umol/L)刺激;⑤四氢化吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)+IL-6刺激组,在培养液中加入PDTC,使之终浓度为10mmol/L,预处理1h后加入rhIL-6(10ng/ml)刺激;⑥SB203580(10umol/L)+IL-6刺激组,在培养液中加入SB203580使之终浓度为10umol/L,预处理1h后加入IL-6(10ng/mL)刺激。各组分别孵育0、2、4、8、12、24h后终止实验,收集细胞。3.将收集的细胞提取蛋白,使用western blot法检测EL的表达。4.以上数据使用统计学进行分析。结果1. AngⅡ可以上调HUVECs EL的表达。HUVECs经AngⅡ刺激后,在4,8,12h时其EL的表达量分别为0.362±0.041,0.738±0.034和0.387±0.051,均较0h(0.254±0.027)时明显增加,均p<0.05。2. PDTC可以抑制由AngⅡ引起的EL表达的增高。HUVECs经PDTC预处理1h后再加入AngⅡ刺激,其EL表达量在作用4,8,12h时分别为0.287±0.037,0.433±0.041,0.303±0.025,与AngⅡ刺激组在相应时间段内EL的表达量相比明显降低,均p<0.05。3.SB203580可以抑制由AngⅡ引起的EL表达的增高。HUVECs经SB203580预处理1h后再加入AngⅡ刺激,其EL表达量在作用4,8,12h时分别为0.258±0.027,0.372±0.038,0.296±0.034,与AngⅡ刺激组在相应时间段内EL的表达量相比明显降低,均p<0.05。4.IL-6可以上调HUVECs EL的表达。HUVECs经IL-6刺激后,在4,8,12h时其EL的表达量分别为0.293±0.062,0.633±0.052,0.462±0.065,均较Oh(0.254±0.027)时明显增加,均p<0.05。5. PDTC可以抑制由IL-6引起的EL表达的增高。HUVECs经PDTC预处理1h后再加入AngⅡ刺激,其EL表达量在作用4,8,12h时分别为0.208±0.056,0.582±0.036,0.428±0.066,与IL-6刺激组在相应时间段内的EL表达量相比明显降低,均p<0.05。6.SB203580可以抑制由IL-6引起的EL表达的增高。HUVECs经SB203580预处理1h后再加入AngⅡ刺激,其EL表达量在作用4,8,12,24h时分别为0.238±0.023,0.508±0.058,0.423±0.052,0.199±0.042,与IL-6刺激组在相应时间段内的EL表达量相比明显降低,均p<0.05。结论1. AngⅡ可能通过NF-κB和p38MAPK信号传导通路促进人脐静脉内皮细胞中内皮脂肪酶的表达。2.IL-6可能通过NF-κB和p38MAPK信号传导通路促进人脐静脉内皮细胞中内皮脂肪酶的表达。