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前言 膀胱移行细胞癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，复发及转移为其显著的生物学特征，基底膜（base-ment membrane,BM）是肿瘤浸润转移的一道天然屏障，基底膜的主要成分是Ⅳ型胶原。Ⅳ型胶原酶MMP2（明胶酶A分子量72KD）和MMP9（明胶酶B分子量92KD）与膀胱移行细胞癌的关系最为密切，能够特异性地降解基底膜（BM）的主要成份Ⅳ型胶原，而促进肿瘤的浸润转移，以往研究MMP2和MMP9与膀胱移行细胞癌的关系多采用免疫组化和原位杂交的方法，膀胱移行细胞癌尿液MMP2及MMP9的检测报道较少，本实验采用明胶酶谱法（Zymograpky 法）检测不同分期、分级膀胱移行细胞癌患者尿液中MMP2和MMP9的表达，并与尿脱落细胞学检查进行对比，探讨膀胱移行细胞癌患者尿液中MMP2及MMP9与膀胱移行细胞癌分期分级的关系，以明确MMP2及MMP9是否具有早期诊断价值，以及对膀胱移行细胞癌的术式选择是否有价值，报告如下。 材料与方法 一、一般资料 2001.09～11月住院的膀胱移行细胞癌患者40例，其中男30例，女10例，年龄36～77岁，平均62岁，40例膀胱移行细胞癌患者均经术后病理证实，均为移行细胞癌，其中按WHO标准Ⅰ级11例，Ⅱ级23例，Ⅲ级6例，按UICC标准T1 21例，T2 12例，T3-4 7例。 二、实验所需仪器及试剂 仪器：DYY-Ⅲ型电泳仪 DYY一皿28C型电泳槽 QUEVE恒温箱 LKB2219型恒温水浴箱 超速低温高心机 试剂：丙烯酸胺 甲叉双丙烯酸胺 明胶 10助 SDS－PA防胶（含 1．omg／Inl明胶） 2．5％Titon X－100 考马斯亮兰R250 三、方法 二．标本收集 留取膀就移行细胞癌患者晨尿50nil，4℃条件下300r／min离心10分钟，收集沉淀，－20℃保存备用，同时常规行尿脱落细胞检查。 2．明胶酶活性分析（Zymoonho） ①常温下标本解冻，加裂解液，匀浆。 欧℃条件下15000r／min，离心60分钟。 ③收集上清，酚试剂法进行蛋白定量，在相同蛋白浓度条件下取 25 gi样本上样于含 1．omg／rrd明胶的 10％SDS－PAGE胶（聚丙烯酸胺凝胶X上层覆以 5％的浓缩胶作为分离胶，以 30毗恒流电流电泳3小时。 ④电泳后凝胶于 2．5％Triton X－100中浸泡 3 ／J’时。 ⑤然后在 50Mm Tis—Hcf，200rnmVL NaCI，10nunol／LCaC12＊H值 7．5溶液中孵育 30h。 ⑤孵育结束后以0．5％考马斯亮兰R25030％甲醇上0％乙酸染色4小时。 ①脱色液（甲醇：乙酸：水一3：l：6）脱色4小时。 ·2· 3．图像分析 利用UVP凝胶成像分析系统对ZymograPhy电泳结果进行灰度扫描，以灰度面积代表酶活性，对各细胞的酶活性进行定量比较。 四、统计学分析 两组间均数比较采用 t检验，两组间率的比较采用X‘检验。 结 果 一、膀脱移行细胞癌尿液 MMPZ及 MMPg活性比较 MMPz及MMPg阳性结果为蓝色背景下的透亮带。40例膀fi移行细胞癌中 MMPz表达者 32例，MMPO表达者 38例，MMPz和MMPO同时未表达者2例，同时表达者32例。MMPz及 MMPO的活性随着膀航移行细胞癌临床分期及病理分级的增高而升高，且MMPO活性明显高于 MMPz。MMPz及 MMPO在初发与复发及单发与初发膀既移行细胞癌间的比较无显著差异 p＞0．05，肿瘤直径＞3．ocm的膀既移行细胞癌＊MPz及＊＊民活性明显高于直径＜3．ocm的膀脱移行细胞癌，MMP。及 MMPO活性，P＜0．05。 二、膀就移行细胞癌尿液中M＊巳、＊＊ 及尿细胞学敏感性比较 40例膀既移行细胞癌中MMPz阳性32例，敏感性80％，38例MMPg阳性，敏感性 95％，尿细胞学阳性 13例，敏感性 32．5％。MMPg及 MMP。敏感性明显高于尿细胞学检查，p＜0·05。同时MMPg敏感性明显高于 MMPZ，p＜0．05。MMPZ活性在 1级与 I十皿级及 Tl与 T：叶之间比较 P＜of．05，在其它分期、分级间比较 P＞0．05。MMPg在各分期、分级间比较 p＞0．05。MMPZ及 MMP。敏感性在初发与复发、单发与多发以及肿瘤大小之间比较无明显差异，p＞0．05。 ·3· 讨 论 浸润、转移是肿瘤细胞、宿主细胞及细胞外基质（ECM）之间一系列主动、复杂、多步骤相互作用的过程，肿瘤细胞与周围基质细胞相互作用决定了恶性肿瘤细胞的生物学行为。肿瘤的浸润转移首先必须发生基底膜pM）的降解，基底膜是主要由IV型胶原组成的致密的网状结构。肿瘤的浸润、转移是一个主动过程山Ot－ta把肿瘤的浸润、转移过程概括为三个步骤：①肿瘤细胞与细胞外基质成分特异性粘附；②肿瘤细胞或基质细胞分泌蛋白水解酶，降解细胞外基质（ECM）和基底膜，破坏BM屏障；③肿瘤细胞穿透血管或淋巴管壁向远处转移或直接侵人到周围组织中。肿瘤细胞在多种生长因子的作用下形成转移性?