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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是一种以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为特征的传染病。其病原猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS virus, PRRSV)分为两个基因型,分别是以在欧洲分离的Lelystad株(LV株)为代表的欧洲基因型(Ⅰ型)和在北美分离的VR2332株为代表的北美基因型(Ⅱ型)。PRRSV为有囊膜的单股正义RNA病毒,其基因组大小为15.5kb左右,包含9个开放阅读框,属于套式病毒目(Order Nidovirales)、动脉炎病毒科(Arteriviridae)成员。中国自1995年爆发PRRS以来,该病已经遍及全国,成为对养猪业危害最为严重的疫病之一,给养猪业带来了严重的经济损失。国内自1996年首次分离到PRRSV,已经有数株北美型PRRSV基因组全序列和部分序列发表的报道,但未见有欧洲型PRRSV流行。然而,近来国内有报道称从临床病料中通过RT-PCR方法检测到了欧洲型PRRSV的存在。国内曾经广泛使用过欧洲型PRRSV(AMERVAC-PRRS/A3)弱毒疫苗,为了研究欧洲型弱毒疫苗株PRRSV与病料中检测出的欧洲型PRRSV的关系,应用RT-PCR方法分5段扩增了欧洲型猪繁殖与呼吸综合征(PRRSV)活疫苗AMERVAC-PRRS/A3弱毒株的全基因组,扩增产物分别克隆入pCR BluntII-TOPO载体中,并测序。结果表明,该弱毒株基因组序列全长为15098bp,不包括poly(A)尾。通过该序列与相关PRRSV序列同源性比较,结果显示Ningbo42株ORF7基因(EF473137)核苷酸同源性为100%,FJ0603株NSP2基因(EF592535)核苷酸同源性为98%。我国所检测到的欧洲型PRRSV RT-PCR阳性样品很可能与欧洲型PRRSV弱毒疫苗的使用有关。为了进一步解析欧洲型PRRSV的复制过程及调控机制,我们构建了AMERVAC-PRRS/A3株PRRSV的感染性cDNA克隆。首先将病毒基因组RNA构建成病毒全长基因组cDNA克隆,并使其置于T7原核启动子的控制之下。通过转染T7启动子启动的病毒基因组全长cDNA克隆的RNA体外转录物于敏感细胞,可使敏感细胞产生细胞病变(CPE),并产生感染性子代病毒。拯救病毒能够稳定传代,其生长特性与亲本病毒基本一致,说明该PRRSV感染性cDNA克隆构建成功。欧洲型PRRSV感染性克隆的建立将有助于我们更好的理解PRRSV的分子机制。