【摘 要】
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真菌毒素是真菌在食品或饲料中生长繁殖所产生的次级代谢产物,由于真菌毒素自身强烈的致癌性、致畸性以及致突变性,不仅会对农产品及动物,甚至会对人类的生命健康造成极大的威胁。目前,检测真菌毒素的方法有很多,但大多数都存在耗时长、成本高、耗费试剂及繁琐的样品处理过程等问题,由此可见,开发出一种检测时间短、灵敏度高、特异性强的方法刻不容缓。因此,本文建立了一种基于光子晶体微球非标记荧光免疫检测谷物中多元真菌
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真菌毒素是真菌在食品或饲料中生长繁殖所产生的次级代谢产物,由于真菌毒素自身强烈的致癌性、致畸性以及致突变性,不仅会对农产品及动物,甚至会对人类的生命健康造成极大的威胁。目前,检测真菌毒素的方法有很多,但大多数都存在耗时长、成本高、耗费试剂及繁琐的样品处理过程等问题,由此可见,开发出一种检测时间短、灵敏度高、特异性强的方法刻不容缓。因此,本文建立了一种基于光子晶体微球非标记荧光免疫检测谷物中多元真菌毒素的方法。本文利用实验室平台,制备了光子晶体微球,并对其进行了金相显微镜、扫描电镜以及透射电镜表征,结果表明,所制备的光子晶体微球大小均一且结构稳定,进而对其进行了基团修饰,分别修饰了环氧基、醛基以及羧基,对比其荧光信号,结果表明修饰环氧基较好。同时使用传统的柠檬酸三钠还原法制备了金纳米粒子,并对其进行了基团修饰以及活化。最后通过对免疫竞争反应后的光子晶体微球进行扫描电镜表征,以确定光子晶体及金纳米颗粒的结合情况。本文建立了一种基于光子晶体微球非标记荧光免疫检测谷物中黄曲霉毒素B1（AFB1）的方法。首先,分别优化了AFB1的抗原及抗体浓度。最终确定了A FB1-BSA及AFB1-Ab的最适浓度分别为80μg/m L和60μg/m L,根据优化条件,制作出AFB1的标准曲线,结果表明:AFB1的检测范围为0.1-10ng/m L,检测线性方程为y=-1189.43949logx+5292.31172,线性相关系数（R~2）为0.995,检测限为0.151ng/m L。在大米、小麦及玉米中AFB1的加标回收率分别为大米:84.07%±5.71%-98.59%±7.47%,小麦:93.88%±10.02%-100.43%±5.83%,玉米:92.78%±14.74%-101.02%±5.13%。本法测得总体回收率在84.07%±5.71%-101.02%±5.13%。ELISA法测得的AFB1加标回收率分别为大米:86.54%±6.37%-97.19%±1.84%,小麦:89.55%±1.11%-117.26%±5.77%,玉米:84.99%±3.53%-100.04%±3.24%,E LISA法测得总体回收率在84.99%±3.53%-117.26%±5.77%,两种方法测得结果基本保持一致,证明本文所设计的方法是切实可行的。接着分别建立了赭曲酶毒素A（OTA）和伏马毒素B1（FB1）的非标记荧光免疫检测方法,结果显示:OTA检测线性方程为y=-560.78811logx+1062.86894,线性相关系数（R~2）为0.999,OTA的检测限为0.0227ng/m L,FB1检测线性方程为y=-92.98732logx+603.51418,线性相关系数（R~2）为0.994,FB1的检测限为0.159ng/m L。本法测得的OTA加标回收率分别为大米:80.90%±5.82%-115.92%±7.28%,小麦:67.79%±4.04%-97.79%±9.40%,玉米:85.15%±4.38%-93.37%±4.61%。总体回收率:67.79%±4.04%-115.92%±7.28%,本法测得的FB1加标回收率分别为大米:88.96%±12.26%-97.24%±12.65%,小麦:86.64%±2.54%-97.78%±11.22%,玉米:85.15%±4.38%-93.37%±4.61%。总体回收率:85.15%±4.38%-97.78%±11.22%。通过比较建立的方法与ELISA法测得的回收率,发现两种方法回收率基本保持一致。由此可以看出所建立的方法可以适用于不同种类真菌毒素的检测,为未来食品中不同种类真菌毒素检测奠定了良好的基础。
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