目的:本实验通过研究胡蜂粗毒及其分段提取物对肿瘤坏死因子TNF-α诱导的类风湿性关节炎成纤维滑膜细胞MH7A凋亡和炎症的影响,进一步探讨抑制MH7A细胞增殖和炎症作用最佳的胡蜂毒提取物,并初步探究其诱导MH7A细胞凋亡和降低炎症反应可能的作用机制。方法:本实验通过TNF-α诱导MH7A细胞发生炎症反应并有过度增殖现象,造成RA模型。造模成功后,将胡蜂粗毒、<3 k Da胡蜂毒、3～10 k Da胡蜂毒和>10 k Da分别命名为胡蜂粗毒、胡蜂毒Ⅰ、胡蜂毒Ⅱ和胡蜂毒Ⅲ。1.胡蜂粗毒、胡蜂毒Ⅰ和胡蜂毒Ⅱ体外抗类风湿性关节炎活性筛选。采用超速离心管法将胡蜂粗毒按分子量大小(<3 k Da、3～10 k Da、>10 k Da)分为胡蜂毒Ⅰ、胡蜂毒Ⅱ和胡蜂毒Ⅲ。因胡蜂毒Ⅲ含有大量过敏介质,故不作为活性筛选对象。采用MTT法检测细胞增殖/抑制情况并确定胡蜂粗毒抑制MH7A细胞增殖的最佳作用时间;用酶联免疫吸附法检测炎症因子IL-1β和IL-6表达情况,分别考察胡蜂粗毒、胡蜂毒Ⅰ和胡蜂毒Ⅱ对RA作用最佳有效部位。2.胡蜂毒Ⅱ体外抗类风湿性关节炎作用机制初探。采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率变化和Western blotting法检测JAK2/STAT3和Bax/Bcl-2信号通路p-JAK2、p-STAT3、Bax、Bcl-2蛋白表达的变化情况。结果:1.胡蜂粗毒作用于MH7A细胞24 h后其半数抑制率与作用48 h和72 h无明显性差异;胡蜂粗毒、胡蜂毒Ⅰ和胡蜂毒Ⅱ均能抑制MH7A细胞的增殖;抑制TNF-α诱导的MH7A细胞炎症因子IL-1β和IL-6的表达,具有显著性差异(p<0.01或p<0.05),且呈现剂量依赖性。但胡蜂毒Ⅱ活性效果优于胡蜂毒和胡蜂毒Ⅰ。2.胡蜂毒Ⅱ可增加TNF-α诱导的MH7A细胞的凋亡率,且能抑制JAK2/STAT3信号通路中的JAK2和STAT3的磷酸化蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白表达,同时上调Bax蛋白表达,具有显著性差异(p<0.01或p<0.05),且呈现剂量依赖性。结论:实验结果表明,胡蜂毒可以通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活从而下调TNF-α诱导的MH7A细胞炎症细胞因子(IL-1β、IL-6)的表达,发挥抗炎作用,并且可调控线粒体内Bax、Bcl-2蛋白诱导TNF-α刺激的MH7A细胞凋亡,抑制其增殖作用。研究发现,胡蜂毒Ⅱ是发挥抗RA作用的有效部位,为进一步开发胡蜂毒活性单体提供一定的实验依据。