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目的:体外模拟星形胶质细胞(Astrocyte cells AC)脑缺血损伤模型,观察骨髓基质细胞(Bone Marrow stromal cell BMSCs)对缺氧缺糖/复氧后星形胶质细胞凋亡的影响和凋亡信通路中Bcl-2/Bax蛋白表达的变化。探讨骨髓基质细胞治疗脑缺血损伤的可能机制。
方法:体外培养SD大鼠的BMSCs和新生鼠的AC,并纯化扩增,鉴定。采用三气培养箱,将星形胶质细胞缺氧缺糖8h后分别复氧24h、48h、72h成功建立星形胶质细胞缺氧缺糖/复氧模型,采用Transwell共培养体系,将BMSCs和缺氧缺糖星形胶质细胞共培养24h、48h、72h,体外建立脑缺血后BMSCs与AC共培养模型。实验分为正常对照组(N组)、缺氧缺糖/复氧组(H/R组)、共培养组(C组)。观察BMSCs对缺氧缺糖/复氧后星形胶质细胞凋亡的影响和凋亡信号通路中Bcl-2/Bax蛋白表达的变化。采用Annexin V-FTTC检测AC细胞的凋亡、Western blot检测Bcl-2/Bax蛋白表达,SPSS13.0统计软件进行数据分析。
结果:1.成功的建立了大鼠骨髓基质细胞、新生鼠星形胶质细胞分离、纯化、鉴定、扩增及共培养的方法体系。2.在体外采用Transwell共培养体系成功模拟了脑缺血性AC损伤模型。3.共培养组与缺氧缺糖/复氧组比较各时间点AC的凋亡明显减少(P＜0.05)。4.共培养组(C组)Bcl-2/Bax比值较对照组(N组)有所降低,但与H/R组比较,Bcl-2/Bax比值明显增高差异有统计学意义(P＜0.05),而缺氧缺糖/复氧单独培养组(H/R组)Bcl-2/Bax比值较对照组(N组)明显降低持差异有统计学意义(p＜0.05)。
结论:1.缺氧缺糖/复氧后的星形胶质细胞损害随着时间延长逐渐加重。2.骨髓基质细胞通过调控星形胶质细胞Bcl-2/Bax蛋白的表达抑制AC凋亡,从而减轻缺氧缺糖/复氧后的AC的损害。