研究背景:流感病毒（流感,influenza virus）是一种具有高度传染性的人类呼吸道疾病病原体,具有传播力强、范围广、致病率高和死亡率高的特点;同时它也是一个涉及到人类医疗、健康和经济社会问题,但目前临床上还没有得到令人满意的治疗和预防方法。疫苗接种是控制季节性流感和快速遏制流感大流行的基石,但由于流感病毒发生的抗原漂移和抗原转变导致疫苗的效率差异很大,因此仅仅以疫苗为策略是不够的。与通过疫苗诱导适当的抗原特异性和免疫原性不同,抗病毒药物可以在不限制抗原性的情况下保护宿主免受流感病毒感染,并且在短的时间内其抗病毒作用具有很大的优势,特别是在紧急情况下,例如人类不熟悉的人畜共患感染及新亚型毒株引起的大流行。四氢异喹啉环具有广泛的药理特性在药物开发中占有重要地位,研究者经过结构改造后合成的四氢异喹啉类化合物具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、抗凝血、支气管扩张及中枢神经系统作用活性。研究目的:本课题通过合成一系列具有四氢异喹啉环结构的化合物,并于体外进行抗流感病毒活性的筛选,进一步研究其抗病毒活性和作用机制,为开发新型抗流感病毒药物提供新的思路。研究方法:1、鸡胚尿囊腔法扩增流感病毒,CPE效应实验和空斑形成实验分别检测病毒TCID50 和 PFU。2、MTT比色法检测四氢异喹啉类化合物的细胞毒性和抗甲型流感病毒活性。3、MTT比色法检测YX-99-4-S1对MDCK细胞、A549细胞和Beas-2B细胞的细胞毒性,并测定对不同IAV毒株的抗病毒效果。4、Western blotting、RT-qPCR和间接免疫荧光法评价YX-99-4-S1对IAV病毒基因表达的影响。5、空斑形成实验考察YX-99-4-S1对子代病毒载量的影响。6、血凝抑制实验、溶血实验和H5N1假病毒抑制实验探讨YX-99-4-S1对病毒进入细胞的影响,神经氨酸酶抑制实验检测对子代病毒颗粒释放的影响;利用加药模式实验、单轮复制给药实验确定YX-99-4-S1作用的具体阶段。7、通过Mini-replicon实验、特异性逆转录实验、蛋白纯化技术、荧光偏振实验、表面等离子共振技术和分子对接模拟技术确定YX-99-4-S1的作用靶点。8、通过MTT比色法、CPE效应实验、Western blotting、RT-qPCR、假病毒包备技术和单荧光素酶基因表达实验检测YX-99-4-S1对寨卡病毒、冠状病毒、疱疹病毒、登革病毒和HIV克隆病毒的抗病毒活性。实验结果:1、A/WSN/1933（H1N1）的 TCID50 为 105.5TCID50/100 μl,PFU 为 1.9×10-6 PFU/ml。2、筛选得到18个四氢异喹啉类化合物具有抗甲型流感病毒效果,IC50值处于0.76-8.60 μM之间。3、YX-99-4-S1可抑制 MDCK 细胞、A549 细胞和 Beas-2B 细胞中 A/WSN/1933（H1N1）的感染,减少子代病毒载量;且在检测浓度范围内对三种细胞系基本无毒性。4、YX-99-4-S1不抑制病毒引起的血凝和溶血反应,也对H5N1假病毒感染无效。5、YX-99-4-S1不抑制神经氨酸酶活性。6、YX-99-4-S1于病毒感染细胞后的0-8 h起效。7、YX-99-4-S1可抑制病毒RNA依赖性RNA聚合酶复合物活性,影响vRNA和cRNA的表达。8、YX-99-4-S1通过与PB2 cap结合结构域特异性结合影响其帽捕获活性。9、YX-99-4-S1 对 HSV-1、HSV-2、ZIKA、HCoV-OC43 具有抗病毒活性,对DENV-2、HIV克隆病毒无抑制活性。实验结论:1、四氢异喹啉类化合物YX-99-4-S1对IAV不同毒株具有较好的抑制活性,且在检测的活性浓度范围下对细胞基本无毒性。2、YX-99-4-S1可浓度依赖性地抑制IAV蛋白和mRNA的表达,并减少子代病毒载量。3、YX-99-4-S1作用于病毒基因组复制和转录翻译阶段,通过与PB2 cap结合结构域相互作用影响病毒RNA聚合酶的活性,从而抑制vRNA的复制和转录来发挥抗病毒作用。4、YX-99-4-S1的抗病毒能力具有一定的广谱性,对疱疹病毒、寨卡病毒和冠状病毒均具有抑制活性。