分子影像在蒙药机制研究中初探

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hbhszs
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目的:通过分子探针99mTc-3PRGD2在体观察蒙药森登-4汤治疗类风湿性关节炎大鼠模型前后显像剂摄取变化,并与实验室血清学检测、病理结果、免疫组化检测结果比较,探究蒙药抗类风湿关节炎的治疗机制,为蒙医临床治疗类风湿关节炎奠定理论基础并建立活体筛选和验证蒙药疗效的评估模式。方法:1、将健康雌性SD大鼠随机分为2组:胶原诱导性关节炎(collagen induced arthritis,CIA)组及空白对照组。其中CIA组大鼠采用牛Ⅱ型胶原乳剂免疫诱导法建立关节炎模型。2、将前期实验建模成功的CIA组大鼠随机分为人肿瘤坏死因子拮抗剂(依那西普)治疗组、蒙药复方森登-4汤治疗组及未经任何药物治疗对照组(以下简称“未治疗组”)。3、在造模后以及分组治疗前后对研究对象进行一般状态及局部关节状态的观察,称量体重(weight,WT)、评估关节炎指数评分(arthritis index,AI),并采用ROI技术测量分析大鼠在造模以及分组治疗前后四肢关节(T)与纵隔(NT)99mTc-3PRGD2放射性计数比值(T/NT)的变化情况。4、使用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)同步检测实验大鼠在造模及治疗前后血清VEGF、TNF-α及αvβ3表达水平。5、将造模成功后CIA组部分大鼠、空白对照组大鼠及分组治疗后全部大鼠处死行后足远端趾间关节、踝关节病理切片,苏木素-伊红(HE)染色并进行关节滑膜增生评分。利用免疫组化同步检测实验大鼠关节滑膜组织中VEGF、TNF-α、ανβ3、CD31、CD34表达水平,采用半定量积分法评价染色结果。6、采用SPSS21.0统计软件对数据进行统计分析。符合正态分布的计量资料描述采用“x?s”,组间比较采用t检验、方差分析;不满足正态分布的计量资料描述采用M(P25,P75),组间比较采用非参数检验。两个变量之间相关性采用双变量相关分析,双变量正态分布选择Pearson相关系数,非双变量正态分布选择Spearman相关系数。检验水准α=0.05,P≤0.05为差异有统计学意义。结果:1、CIA组共176只(死亡13只)SD大鼠,95只造模成功,造模率约为58%。CIA组大鼠临床症状显著,病理滑膜细胞增生评分及滑膜组织中VEGF、ανβ3、TNF-α、CD31、CD34表达水平检测结果与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。2、造模后CIA组大鼠实验室血清学VEGF、ανβ3、TNF-α水平检测结果分别为308.74±73.50,26.44±6.41,378.33±78.31,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。3、造模前CIA组大鼠与空白对照组关节部位T/NT值分别为0.226±0.031,0.217±0.030,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。造模2周后T/NT值分别为0.460±0.090,0.211±0.035;4周后分别为0.693±0.148,0.215±0.029,两组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。4、造模后CIA组大鼠病变关节部位T/NT值与AI值、病理关节滑膜细胞增生评分、实验室血清学VEGF、ανβ3、TNF-α水平及滑膜组织中VEGF、TNF-α、ανβ3、CD31、CD34表达水平均呈正相关(r=0.461、0.609、0.531、0.375、0.471、0.626、0.703、0.706、0.613、0.729,P<0.05)。5、经依那西普或蒙药森登-4治疗后CIA组大鼠T/NT值均下降,治疗前分别为0.713±0.106,0.676±0.126;治疗3周后分别为0.394±0.168,0.430±0.143;6w后分别为0.238±0.099,0.260±0.937。治疗前与未治疗组相比差异无统计学意义(P>0.05);治疗3w及6w后与未治疗组相比差异均有统计学意义(P<0.05),且依那西普治疗组和蒙药森登-4治疗组间比较差异没有统计学意义(P>0.05)。6、经依那西普或森登-4治疗6w后受累关节血管新生减少,症状逐渐减轻,AI值、病理滑膜细胞增生评估、实验室VEGF、TNF-α、ανβ3测定结果及滑膜组织中VEGF、TNF-α、ανβ3、CD31、CD34表达水平均下降,且T/NT值与上述指标均呈正相关(依那西普治疗组r=0.422、0.632、0.549、0.500、0.522、0.472、0.457、0.558、0.492、0.697,P<0.05;蒙药森登-4治疗组r=0.430、0.687、0.593、0.561、0.579、0.669、0.490、0.622、0.597、0.545,P<0.05;未治疗组r=0.619、0.864、0.549、0.796、0.619、0.582、0.644、0.648、0.764、0.605,P<0.05)。结论:(1)以森登-4汤为代表的蒙医药可通过抑制新生血管形成延缓病情进展,有效改善临床症状。(2)99mTc-3PRGD2靶向受体显像是良好的活体筛选和验证蒙药疗效的评估模式。
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