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本文分析研究了对映-贝壳杉烷二萜rabdosin B诱导急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60向成熟粒细胞分化的特征并且探讨了此过程是否通过NADPH氧化酶介导的活性氧调节。本实验首先利用台盼蓝排染法检测了rabdosin B对HL-60细胞的生长抑制作用;用流式细胞术结合PI检测了rabdosin B引起HL-60细胞周期阻滞的作用并用流式检测了细胞大小与粒度;然后通过吉姆萨染色、Hochest33342染色、NBT(对硝基四氮唑蓝,nitrotetrazolium blue chloride)还原能力、荧光颗粒吞噬能力以及细胞表面抗原CD11b的表达情况的检测探索了rabdosin B诱导HL-60细胞向成熟粒细胞分化的能力,最后通过ROS清除剂NAC(N-acetyl-L-cysteine)、NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(apocynin,APO)、联苯基三价碘(diphenyleneiodonium,DPI)三种抑制剂联合rabdosin B检测细胞内ROS以及以上各种形态学、功能学变化以及细胞表面抗原在不同处理下的表达水平,对rabdosin B诱导分化的机制进行了初步探讨;其结果如下:1.台盼蓝染色法发现:1.0μmol/L、3.0μmol/L和5.0μmol/L rabdosin B以时间和浓度的依赖性的方式对HL-60细胞的生长有明显的抑制作用。其中在48 h时,1.0μmol/L rabdosin B处理组和1.2μmol/L ATRA处理组具有相似的结果。2.采用以PI染色流式细胞术检测了rabdosin B对HL-60细胞周期的影响,结果表明该化合物能以浓度依赖性的方式引起HL-60细胞G0/G1期阻滞,抑制细胞生长。3.采用吉姆萨染色法、Hochest33324染色、NBT还原能力检测、细胞吞噬能力检测法以及流式细胞术检测发现:随着药物浓度的增加,细胞内肾形核、分叶核增多,NBT还原能力增强,细胞吞噬能力增强,CD11b阳性细胞率增大,说明rabdosin B能够诱导HL-60细胞向成熟粒细胞分化。4.采用DCFH-DA染色及流式细胞术检测并结合荧光显微镜观察HL-60细胞内ROS水平,发现rabdosin B作用6 h、9 h后细胞内ROS显著升高,rabdosin B处理24 h和48 h与6 h、9 h后细胞内ROS比较,有所降低,说明短时间内rabdosin B可以引起细胞内ROS的上升;在6 h处理组中同时加入0.3 mmol/L NAC和3.0μmol/L rabdosin B后,细胞内细胞内ROS水平比3.0μmol/L rabdosin B单独处理后明显减少,说明NAC可以降低rabdosin B引起的细胞内ROS的产生。5.Rabdosin B会引起HL-60细胞活性氧浓度的升高,且活性氧清除剂0.3 mmol/L NAC可以抑制此过程活性氧的升高;NBT分光光度法显示rabdosin B会引起NADPH氧化酶活性升高,NADPH氧化酶抑制剂APO和DPI均可抑制rabdosin B引起的NADPH氧化酶活性升高,提示rabdosin B引起的分化过程可能与NADPH氧化酶源性的ROS相关。6.0.3 mmol/L NAC、0.1mmol/L APO与0.1μmol/L DPI分别联合3.0μmol/L rabdosin B作用72h后通过吉姆萨染色法、NBT还原能力测试以及细胞表面抗原CD11b的表达,发现0.3mmol/L NAC、0.1 mmol/L APO与0.1μmol/L DPI联合3.0μmol/L rabdosin B组比3.0μmol/L rabdosin B单独作用,肾形核及分叶核细胞数目减少,细胞NBT还原和吞噬能力减弱,CD11b表达水平下降,提示NAC、APO和DPI可以抑制rabdosin B诱导的分化作用,rabdosin B通过调节NADPH氧化酶源性活性氧诱导HL-60向粒细胞分化。