飞机草总黄酮对小鼠的免疫调节作用及其机制初探

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飞机草(Chromolaene odorata Linn.)为菊科泽兰属的多年生草本植物,原产中美洲,是我国首批入侵物种,主要分布在南方地区。飞机草可入药,民间常用其治疗感冒、腹泻和皮肤疾病,亦可用于止血散瘀,治疗跌打肿痛。飞机草主要有效成分为黄酮,具有多种生物活性。本研究采集飞机草地上部分,使用乙醇浸提超声波辅助提取飞机草总黄酮(Flavonoids from C.odorata,FCO),探究FCO对免疫抑制小鼠的免疫调节作用及其机制,为开发新型中草药饲料添加剂提供试验依据。本研究主要进行了以下试验:(1)以70%乙醇为溶剂,超声波辅助提取,料液比1︰50(g/m L)、提取温度70°C、提取时间6 h提取FCO。将所提总黄酮经硅胶柱层析法纯化后,通过超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UHPLC-QTOF-MS)检测总黄酮种类;(2)以昆明种小鼠为试验动物,用环磷酰胺建立免疫抑制模型,探究低(30 mg·kg-1·d)、中(150 mg·kg-1·d)、高(750 mg·kg-1·d)三个剂量FCO对小鼠免疫器官(胸腺、脾脏)指数的影响,对血液中WBC、LYM、MON、NEU、ESO、BASO、RBC、HGB及PLT指标的影响,对血清免疫球蛋白Ig G和Ig M的影响,对血清细胞因子IFN-γ、IL-2及TNF-α的影响和对免疫器官组织结构的影响;(3)通过RT-q PCR方法探究FCO对小鼠脾脏IFN-γ、GATA3和Tbx21 m RNA相对表达量的影响。研究结果表明:(1)本试验采用乙醇浸提法辅以超声波技术,以浓度70%乙醇、料液比1︰50(g/m L)、提取温度70°C、提取时间6 h的条件提取FCO,最终测得总黄酮的提取率为8.29%,通过UHPLC-QTOF-MS共检测出38种黄酮类化合物。(2)与空白对照组相比,各组小鼠胸腺指数、脾脏指数均极显著下降(P﹤0.01);与免疫抑制组相比,FCO高剂量组小鼠免疫器官指数显著增加(P﹤0.05),但FCO低、中剂量组无显著变化。血液学检测结果显示,与免疫抑制组相比,FCO试验组WBC均显著增加(P﹤0.05),FCO高剂量组LYM和MON显著增加(P﹤0.05),FCO中剂量组NEU显著增加(P﹤0.05);各组EOS与BASO无明显统计学差异(P>0.05);与免疫抑制组相比,FCO试验组RBC和HGB、FCO高剂量组PLT均显著增加(P<0.05)。血清免疫球蛋白检测结果显示,FCO高剂量组Ig G与FCO中、高剂量组Ig M较免疫抑制组显著升高(P﹤0.05)。血清细胞因子检测结果显示,FCO低、中、高剂量组IFN-γ与免疫抑制组对比无显著差异,但组间呈上升趋势;各组IL-2无明显统计学差异(P>0.05);FCO中、高剂量组TNF-α较免疫抑制组极显著升高(P﹤0.01)。组织切片观察结果显示,空白对照组胸腺及脾脏组织细胞数量正常、结构完整,免疫抑制组胸腺及脾脏组织结构均严重受损、缺失,且细胞数量大量减少,FCO试验组胸腺及脾脏组织结构较免疫抑制组均有不同程度的恢复,且细胞数量未见明显减少。(3)与免疫抑制组相比,FCO试验组小鼠脾脏中Tbx21和IFN-γm RNA相对表达量显著升高(P﹤0.05),GATA3 m RNA相对表达量显著降低(P﹤0.05)。综上所述,通过超声波辅助的乙醇浸提法得到的FCO提取率较高。一定剂量FCO可增加小鼠免疫器官指数,提高免疫抑制小鼠血液WBC、LYM、MON、NEU、RBC、HGB和PLT含量,提升小鼠血清Ig M、Ig G及TNF-α水平,并改善由环磷酰胺所致的免疫器官损伤,保护免疫器官结构,维持其正常功能。一定剂量FCO可提高IFN-γ和Tbx-21 m RNA的相对表达量、降低GATA3 m RNA的相对表达量,以此改善机体Th1/Th2亚群的失衡,达到免疫调节作用。
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