【摘 要】
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番茄(Solanum lycopersicum L.)是最重要的蔬菜作物之一,随着番茄遗传学研究和国际茄科基因组计划(International Solanaceae Genome Projiect,SOL)的发展,番茄己成为转基因
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番茄(Solanum lycopersicum L.)是最重要的蔬菜作物之一,随着番茄遗传学研究和国际茄科基因组计划(International Solanaceae Genome Projiect,SOL)的发展,番茄己成为转基因研究的理想模式植物。植物甜蛋白Thaumatin甜度高、甜味纯、热量低、口感好、无毒害,被消化后可降解为人体所需的各种氨基酸,具有增进或改善食品风味的功能。选择番茄作为生物反应器来生产ThaumatinⅡ有着巨大的商业潜力:首先容易实现外源目的基因的转化;其次,外源基因的成功转入可以提高番茄果实甜味、改善果实品质;第三,借助番茄的高产量进行大量、低成本地生产ThaumatinⅡ甜蛋白,降低了ThaumatinⅡ食品添加剂成本。本文拟以番茄为材料通过转基因技术将ThaumatinⅡ基因通过农杆菌介导法导入番茄,从而提高番茄的果实品质。本论文的研究内容及结果如下:
1.通过对分化和生根培养基的筛选,我们建立了高效的番茄再生体系。统计结果表明0.2mg/L ZT和1.0mg/L IAA配组时分化再生效率最高,而且NAA为0.05mg/L时生根效果最好;
2.以番茄的无菌苗子叶为外植体,以抗卡那霉素的NTPⅡ作为选择标记基因,通过根癌农杆菌介导法,将甜蛋白ThaumatinⅡ基因导入番茄中,共获得了10株独立的抗性转化株系;
3.对获得的10株独立的T0抗性转化株系进行PCR鉴定,10个转化株系PCR都检测得到预期的特异条带;进一步采用Southern杂交对其中T0代的Thau-10转化株进行插入确认;
4.将获得转基因T1的Thau-2和Thau-4种子播种到含有200mg/L Kan的1/2MS培养基上进行遗传特性分析,结果表明转基因株系Thau-2及Thau-4抗性植株和非抗性植株比例均接近3:1,推测两个株系均为单拷贝插入;
5.不同浓度β-estradiol(雌二醇)分别处理T0真叶和T1无菌苗诱导分化Marker-free苗,初步结果表明以4μMβ-estradiol诱导T1无菌苗的效果较好,60个外植体诱导获得了10株分化苗,PCR分析表明有1株分化苗标记基因已被剔除。
本研究已完成了上述前4个方面的工作,目前对诱导获得的Marker-free苗的分子检测正在进行中。
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