论文部分内容阅读
目的：上皮间质转化是胚胎发育过程中的必要步骤,同时,它在肿瘤转移起始过程中也发挥重要作用。上皮间质转化是细胞分化的一种重要形式。酪氨酸磷酸酶SHP2是一种广泛表达的磷酸酶,研究表明它调控各种生物学功能包括细胞分化。SHP2在各种实体肿瘤中存在点突变,提示SHP2参与了肿瘤的发生和进展。SHP2在上皮间质转化过程中的作用仍未有报道。我们的研究目的是探讨SHP2在肿瘤相关的上皮间质转化过程中的作用。方法：为了探讨SHP2在上皮间质转化过程中的作用,我们使用TGFβ1诱导的非小细胞肺癌细胞系A549发生上皮间质转化作为模型。使用过表达或基因沉默的方法从SHP2表达水平研究其对上皮间质转化作用的影响。并过表达SHP2活性增强突变(SHP2E76v)或抑制性点突变(SHP2C459s)及使用SHP2酶活性抑制剂(PHPS1)进一步研究SHP2活性对上皮间质转化作用的影响。同时使用酵母双杂交系统对SHP2相互作用的蛋白进行筛选。进一步研究SHP2参与调控上皮间质转化的分子机制。结果：我们发现SHP2表达下调可以抑制TGFpl诱导的A549细胞上皮间质转化的表型。SHP2活性与EMT呈正相关。SHP2失活突变(SHP2C459S)和SHP2抑制剂(PHPS1)可以下调EMT相关间质标记分子。活化型SHP2点突变(SHP2E76V)可以促进TGFβ1诱导的EMT表型。使用酵母双杂交系统筛选至SHP2PTP结构域相互作用蛋白——Hookl,并经过体外免疫共沉淀验证为阳性结果。在A549细胞中,TGFβ1可以下调Hookl的表达,使用Hook1siRNA沉默Hookl基因表达可以促进EMT表型。过表达Hookl负向调控EMT。通过相互作用片段分析,我们发现Hookl的C端既可以和SHP2PTP结构域结合也可以和SHP2NSH2结构域结合。Hookl表达下调之后,SHP2酶活性升高。同时过表达Hookl与SHP2E76v两种质粒,可以抑制SUP2E76v对TGFβ1诱导的EMT表型的促进效果。提示Hookl可能参与了SHP2自抑制状态的维持,对SHP2活化起负向调控的作用。结论：1. SHP2正向调控了TGFβ1诱导的上皮间质转化。2. Hookl是SHP2新的结合蛋白,可以同SHP2NSH2和PTP结构域结合。3. TGFβ1下调Hookl表达,Hookl负向调控了TGFβ1诱导的上皮间质转化。4. Hookl可能是内源性的SHP2活化的负向调控因子。5. Hookl与SHP2的直接相互作用参与了上皮间质转化的调控。