论文部分内容阅读
目的：错配修复(mismatch repair，MMR)基因的功能主要是维持基因组稳定。DNA复制时会产生一些不配对的碱基对。MMR基因则负责修复这些错配碱基。当错配修复功能缺陷时细胞就会产生突变表型。人们在家族性非息肉性结肠癌的研究中认识了MMR基因突变，研究者发现人类MMR基因突变多集中在hMSH2。hMSH2是人类细胞中与E．Coli．MutS同源基因。近年来研究发现hMSH2在白血病中亦有一定突变率。这提示hMSH2缺陷可能是引起造血祖细胞恶性克隆增殖的原因之一。有关hMSH2表达缺失与急性白血病发生、发展的关系目前国内少见报道。在错配修复功能缺陷的细胞株中已发现p53基因突变率明显增高，研究者推测MMR基因缺陷会引发p53基因突变积累，从而促进恶性肿瘤的发展。野生型p53基因为肿瘤抑制基因，是人类恶性肿瘤中最常改变的基因之一。p53基因产物在修复DNA损伤时也起重要作用，目前已有很多研究证实急性白血病存在p53基因点突变。突变型P53蛋白可以通过免疫细胞化学法检测出。本文对急性非淋巴细胞白血病(ANLL)，急性淋巴细胞白血病(ALL)及对照组患者的骨髓单个核细胞的滴片进行寡核苷酸探针原位杂交法检测hMSH2基因转录出的mRNA，免疫细胞化学法检测突变型P53蛋白，以探讨hMSH2 mRNA及突变型p53蛋白的表达与急性白血病发病之间的关系。郑州大学2004届硕士毕业论文急性白血病中hMSHZ mRNA表达及p53蛋白表达的研究材料与方法:研究对象分为三组:①初治ANLL患者37例，男性24例、女性13例，平均年龄37岁，其中M14例、M218例、M35例、呱7例、M53例。②初治ALL患者26例，男性巧例、女性n例，平均年龄28岁。③对照组25例，男性12例、女性13例，平均年龄35岁，均为骨髓象正常的非肿瘤患者。所有急性白血病患者的分型均依据1986年FAB制定的MIC分型标准制定划分。该实验采集白血病患者及对照者的骨髓 Zml，经淋巴细胞分离液分离单个核细胞制成滴片，用生物素化鼠抗地高新标记的原位杂交法检测hMSHZ转录出的mRNA在各组间的表达百分比，免疫细胞化学法检测突变型p53蛋白在各组间的表达百分比。所得结果用SPSS10.0统计软件包处理，采用方差分析检验，直线相关分析，取Q-0.05为显著性检验水准。结果:(1) ANLL组、ALL组、对照组骨髓细胞中hMSHZ的mRNA检测结果:对照组、ANLL组、ALL组hMSHZ的mRNA表达百分比依次降低，以(x士s)表示，分别为(64.22士8.51)%，(53.98士9.69)%，(32.88士11.46)%。三组之间表达百分比差异均有统计学意义(尸<0.05)。(2) ANLL组、ALL组、对照组骨髓细胞中突变型P53蛋白检测结果:各组骨髓细胞中突变型P53蛋白表达百分比依次升高，以(x士s)表示，对照组、ANLL组、ALL组骨髓细胞的突变型p53蛋白表达百分比分别为(12.63士6.66)%、(21.50士7.72)%、(29.25士9.45)%。ALL组表达百分比高于对照组，差异有统计学意义(尸<0.05);ANLL组表达百分比高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。(3)ANLL、ALL患者不同年龄组之间hMsHZmRNA检测结果:以55岁为界线将ANLL、ALL分别划分为高龄组及低龄组，分别分析ANLL、ALL中年龄因素对hMSHZ表达的影响。结果显示ANLL高龄组与ANLL低龄组hMSHZ mRNA表达百分比以(x士s)表示分别为(46.97士7.21)%、(58.25士8.51)%。经t检验ANLL高龄组与ANLL低龄组有显著性差异 (尸<0.05)。ALL高龄组与ALL低龄组hMSHZ的mRNA表达百分比以(x士s)表示分别为(38.4士8.17)%、(31.88士n.83)%。应用t检验，结果显示ALL高龄组与ALL低龄组无显著性差异(P>0.05)。(4)ANLL、ALL患者不同年龄组之间突变型P53蛋白表达的差异:以55岁为界线将ANLL、ALL分别划分为高龄郑州大学2(X)4届硕士毕业论文急性白血病中hMsHZ mRNA表达及p53蛋白表达的研究组及低龄组，分别分析ANLL、ALL中年龄因素对突变型P53蛋白表达的影响。ANLL高龄组与ANLL低龄组突变型P53蛋白表达百分比以(x士s)表示分别为(18.75士8.16)%、(22.81士7.29)%，经r检验，ANLL低龄组与ANLL高龄组无显著性差异(尸>0.05)。ALL高龄组、ALL低龄组突变型P53蛋白表达百分比以(x士s)表示分别为(26.74士6.70)%、(30.07士9.76)%，经t检验ALL高龄组与ALL低龄组无显著性差异(P>0.05)。(5)hMSHZ的mRNA表达百分比与突变型P53蛋白表达阳性率的相关关系:ANLL组、ALL组、对照组中hMSHZ的mRNA表达百分比与突变型P53蛋白表达百分比呈负相关(:值为一0.45尹<0.05)。结论:(1) ALL、ANLL患者白血病细胞中hMSHZ的mRNA表达百分比降低，说明hMSHZ基因表达缺失可能参与了急性白血病的发生和发展。(2) hMsHZmRNA在高龄的ANLL中表达百分比低于低龄ANLL表达百分比，说明hMSHZ基因表达缺失可能在老龄ANLL患者的发病中更有重要意义。(3)突变型P53蛋白在ALL组、ANLL组中表达百分比均明显高于对照组，说明突变型P53蛋白参与了ALL、ANLL的发病过程。(4)突变型P53蛋白在高龄组的ALL及ANLL表达百分比与低龄组无明显差异，说明急性白血病中年龄因素与突变型P53蛋白增多无关。(5)hMsHZ的mRNA与突变型P53蛋白表达百分比呈现直线负相关，说明hMSHZ mRNA表达缺失与突变型P53蛋白的高表达共同促进了急性白