【摘 要】
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目的中药材羊踯躅中闹羊花毒素III（Rheumatoid arthritis,RJ-III）因其镇痛抗炎生物活性良好,在类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）的治疗中发挥重要作用。论文针对其具有明确的心脏毒性、肝肾毒性和神经毒性,且半衰期短、体内消除快等不足之处,构建叶酸修饰的介孔二氧化硅（mesoporous silica nanoparticles,MSNs）纳米递药系
【基金项目】
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上海市科学技术委员会科技支撑项目（17401902600）；
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目的中药材羊踯躅中闹羊花毒素III（Rheumatoid arthritis,RJ-III）因其镇痛抗炎生物活性良好,在类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）的治疗中发挥重要作用。论文针对其具有明确的心脏毒性、肝肾毒性和神经毒性,且半衰期短、体内消除快等不足之处,构建叶酸修饰的介孔二氧化硅（mesoporous silica nanoparticles,MSNs）纳米递药系统,以期延长RJ-III的体内半衰期、提高抗炎活性,同时提高用药安全性。方法论文采用液质联用手段,建立了RJ-III的体外分析方法;并在制剂前研究中考察了RJ-III的表观油水分配系数与平衡溶解度。同时,通过h ERG钾通道实验,考察RJ-III对心脏的安全性,为载药纳米载体的安全性评价提供依据。在制剂研究中,分别以十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十六烷基三甲基氯化铵（CTAC）为模板剂,采用软模板法制备MCM-41型氨基修饰的介孔二氧化硅纳米粒,分别通过静电吸附与化学接枝法构建用于载药的FA-MSN载体并进行表征,以RJ-III的包封率与载药量为指标,获得优化后的RJ-III@FA-MSN处方与制备工艺,并进行体外释放研究。在制剂抗炎活性评价工作中,论文考察了该制剂在RAW264.7细胞模型及其经LPS诱导后的体外细胞毒性。并进行细胞摄取实验以及基于网络药理学的闹羊花毒素III抗炎靶点筛选,为体内药效研究及安全性评价奠定基础。在安全性评价工作中,论文进行RJ-III及其制剂的小鼠急性毒性实验、溶血性等实验,通过测定半数致死量、胆碱酶活性以及进行组织病理学等检查,考察RJ-III及RJ-III@FA-MSN的安全性。结果论文在制剂前理化性质的考察中,当RJ-III在p H为1.29时,log P值最高,显示RJ-III在偏酸性的环境下脂溶性最好;p H为5～7.4时,水溶性相对较好。论文在体外方法学研究中,我们用高效液相和质谱联用的方法,对RJ-III药物的浓度的定量分析方法进行了考察,所建立的分析方法稳定、准确、且重现性好,为之后的RJ-III新剂型定量研究奠定基础。在心脏毒性评价中,RJ-III对h ERG电流抑制作用的IC50值大于30μM,提示致心律失常的风险较小。论文成功制备RJ-III@FA-MSN纳米粒,粒径117.5 nm,工艺均一稳定。经TEM观察,MSN,FA-MSN,RJ-III@FA-MSN具有均匀和单分散的球形并且具有高度多孔的结构。通过考察包封率和载药量,确定了FA-MSN的合成路线。体外释放研究结果表明,制剂组在96 h后释放量约可以达到60%,具有明显的缓释特征。论文对RJ-III及制剂组在RAW264.7细胞的细胞毒性结果表明,制剂具有较高的安全性。且在经LPS诱导后的RAW264.7细胞中,制剂组较原药组相比,体现出显著的抑制率。在利用网络药理学筛选药物靶点基因研究中,通过PPI网络构建,寻找调控的核心基因,由结果得出,RJ-III药物发挥药理作用的核心靶点为MAGE-A4。在安全性评价结果表明,原药组LD50值为0.183 mg/kg,RJ-III@MSN组LD50值为1.8 mg/kg,RJ-III@FA-MSN组LD50值为1.8 mg/kg;注射给药都无溶血性;各组对小鼠血清中的胆碱酯酶活性无显著影响。结论论文成功建立RJ-III体外分析方法,制备了RJ-III@FA-MSN纳米递药系统,通过体内外研究表明,其制备工艺均一稳定,并具备缓释特征和较高的安全性,且在经LPS诱导后的RAW264.7细胞,显示出明显的抗炎活性。该研究工作,为进一步RJ-III减毒增效的深入研究以及抗RA递药系统的构建提供参考依据。
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