电针结合经颅脉冲电刺激改善缺血性脑损伤大鼠运动功能的作用及机制研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:budd
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目的:本研究利用电针(electroacupuncture,EA)、经颅脉冲电刺激(transcranial pulse current stimulation,t PCS)和EA+t PCS的方法治疗脑梗塞大鼠MCAO模型,观察脑梗塞大鼠神经功能缺损评分和行为学步态的改善情况,同时应用免疫组织化学和蛋白质印迹法等方法检测梗塞灶周围神经元标志物微管相关的蛋白-2(microtubuleassociatedprotein-2,MAP-2)、轴突生长相关的蛋白-43(growth associated protein-43,GAP43)和星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的免疫活性,从中枢神经系统的可塑性出发,探讨EA+t PCS,t PCS和EA对脑缺血/再灌注大鼠偏瘫侧肢体运动功能的改善作用及可能存在的机制。方法:本研究选用60只SD大鼠,应用线栓插入大脑中动脉的脑卒中模型(MCAO),在手术后1d对大鼠行神经功能缺损Bederson评分,将评分1至4分的大鼠按照干预方法的不同分为t PCS组、EA+t PCS组、假手术组(Sham)、EA组和模型组(MCAO)、每组12只。其中Sham组和MCAO组不做任何治疗,EA组、t PCS组和EA+t PCS组在造模后2天开始治疗,治疗时间为7天。每组大鼠在制作模型前进行10天步态训练,并于制作模型前1天、制作模型后1天和制作模型后9天采集步态数据。神经功能缺损评分和平衡木实验在造模后1天和造模后9天采集数据。然后在造模后9天,每组随机获取8只脑组织和4只脑组织,分别用免疫荧光法和Western blot的方法测定MAP-2、GAP-43和GFAP在脑梗死周围的表达变化。结果:1、MCAO组、EA组、t PCS组和EA+t PCS组的大鼠在脑缺血再灌注后1d表现出轻重不一的神经功能障碍,方差分析显示四组之间无统计学意义上的差异(P>0.05)。造模后9天,EA组、t PCS组和EA+t PCS组较干预前得分显著降低(P<0.05)。造模后第9天,四组之间的Bederson神经功能缺损评分存在显著差异(P<0.05)。与MCAO组相比,t PCS组得分明显降低(P<0.05)。2、方差分析显示,造模后1天和造模后9天,四组之间的平衡木测试得分存在明显差异(P<0.05),然后将t PCS组和MCAO组、EA组进行了比较,t PCS组大鼠平衡木实验得分降低具有显著性差异(P<0.05)。3、步态分析结果显示,造模后9d与造模后1d对比,t PCS组大鼠平均运行速度显著增加(P<0.01);大鼠偏瘫侧站立时间(左侧后肢、左侧前肢)显著减少(P<0.05);左侧前肢平均摆动速度和肢体平均速度(左侧前肢、左侧后肢)明显增加(P<0.01)。EA+t PCS组左后肢站立时间较造模后1d显著减少(P<0.01),左侧前爪脚掌与玻璃接触面积增大,(P<0.01)。四组之间左侧后肢平均站立时间,左侧前肢与玻璃的平均接触面积,左侧后肢平均速度的检测结果可见统计学差异(P<0.05)。与MCAO组相比,t PCS组的平均跑步速度,偏瘫肢体(左侧前肢,左侧后肢)的平均跑步速度,左侧前肢的摆动速度和左侧前肢的站立时间在统计上可见显著差异(P<0.05)。EA+t PCS组的左后肢站立时间和左前爪与玻璃的平均接触面积与MCAO组之间的差异可见统计学意义(P<0.05)。4、梗死灶周围MAP-2阳性细胞计数分析显示,t PCS组高于MCAO组(P<0.05),EA组明显低于t PCS组(P<0.05);GAP-43结果分析显示t PCS组阳性细胞计数高于MCAO,但在统计学上无意义(P>0.05);GFAP分析显示t PCS组阳性细胞计数高于MCAO组(P<0.05)。Western blot结果显示,EA组MAP-2灰度值高于MCAO组(P<0.05)。t PCS组、EA+t PCS组相较于MCAO组,灰度值明显升高,但未见统计学意义(P t PCS VS MCAO>0.05,P EA+t PCS VS MCAO>0.05)。MCAO组、EA组相较于Sham组,GAP-43灰度值明显升高(p<0.05),t PCS组、EA+t PCS组明显高于Sham组(P<0.01)。MCAO组和EA+t PCS组GFAP灰度值明显高于Sham组(P<0.01);相较于Sham组,EA组和t PCS组灰度值增加(P<0.05)。结论:1、EA、t PCS和EA+t PCS可以一定程度上提高缺血性脑损伤大鼠的神经功能缺损评分,并改善偏瘫侧大鼠前后肢步态功能,对大鼠的运动功能恢复具有积极作用。2、EA、t PCS和EA结合t PCS可能是通过促进梗死灶周围神经生长相关物质GAP-43和MAP-2的表达从而增加神经突触可塑性来改善缺血性脑损伤大鼠的运动功能障碍。3、EA结合t PCS对脑可塑性变化未见明显增强作用。
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