【摘 要】
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目的:观察施氏宿伤膏治疗木瓜蛋白酶复制的KOA家兔模型疗效,从NLRP3/caspase-1/IL-1β通路探讨施氏宿伤膏干预KOA家兔模型的治疗机制。方法:40只雄性家兔均剃毛备皮,随机分为空白组、模型组、罗浮山风湿膏组、施氏宿伤膏组,每组各10只。空白组10只实验全程备皮,不予干预;模型组、罗浮山风湿膏组、施氏宿伤膏组共30只参照文献在1、4、7天予以右膝关节注射5%木瓜蛋白酶加0.03 mo
【基金项目】
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上海市黄浦区医疗卫生重点研究发展专科—中医骨伤科,资助项目编号为:HWZFK201808；
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目的:观察施氏宿伤膏治疗木瓜蛋白酶复制的KOA家兔模型疗效,从NLRP3/caspase-1/IL-1β通路探讨施氏宿伤膏干预KOA家兔模型的治疗机制。方法:40只雄性家兔均剃毛备皮,随机分为空白组、模型组、罗浮山风湿膏组、施氏宿伤膏组,每组各10只。空白组10只实验全程备皮,不予干预;模型组、罗浮山风湿膏组、施氏宿伤膏组共30只参照文献在1、4、7天予以右膝关节注射5%木瓜蛋白酶加0.03 mol/L-半胱氨酸混合溶液以复制KOA家兔模型,28天后,模型复制成功;罗浮山风湿膏组、施氏宿伤膏组干预治疗2周;干预治疗两周后,对四组实验兔腹主动脉取血检测NLRP3、ASC、IL-1β表达水平,抽取右膝关节液行MMP3、MMP13、IL-18含量检测;膝关节滑膜行RT-PCR检测NLRP3、caspase-1、IL-1β、MMP3、MMP13m RNA表达水平;滑膜HE病理切片参照Krenn’s评分表进行评分、软骨阿利新蓝病理染色参照Mankin’s评分表进行评分;在实验第0、7、14、21、28、35、42天测量家兔体重、皮温等一般状态,记录膝关节被动活动度、膝关节周径、疼痛、步态行一般行为学测量;用Lequesn MG评分表对各组家兔造模前后及治疗后进行行为学评分。结果:1.造模前各组家兔Lequesn MG评分均正常（P＞0.05）;第28天造模成功后空白组对比余三组模型兔之间Lequesn MG评分有显著性差异（P＜0.01）,其他三组模型兔之间基本无差异（P＞0.1）;干预治疗后施氏宿伤膏组和罗浮山风湿膏组Lequesn MG评分下降,对比模型组有显著性差异（P＜0.01）,施氏宿伤膏组、罗浮山风湿膏组、空白组三组组间无统计学差异;2.在应用施氏伤膏干预KOA家兔模型后家兔血清中NLRP3、ASC、IL-1β水平对比模型组显著下调（P＜0.01）;关节液MMP3、MMP13、水平对比模型组显著下调（P＜0.01）;组间比较IL-18含量施氏宿伤膏组与罗浮山风湿膏组比较差异无统计学意义（P＞0.05（P=0.12））,余各组组间均有统计学意义（P＜0.01）。3.施氏伤膏干预KOA家兔后滑膜炎HE染色Krenn’s评分明显下降,空白组与模型组、罗浮山风湿组有显著性差异（P＜0.01）,模型组与施氏宿伤膏组、罗浮山风湿组有显著差异（P＜0.01）;关节软骨Mankin’s评分明显下降,空白组与模型组、罗浮山风湿组有显著性差异（P＜0.01）,模型组与施氏宿伤膏组、罗浮山风湿组有显著差异（P＜0.01）;结论:1.木瓜蛋白酶复制KOA家兔模型可使其关节肿胀、皮温上升、活动受限,其舔舐患肢、跛行等一般行为学表现类似于人类临床中的KOA疼痛症状;分析家兔膝关节MRI,可见软骨破坏严重,软骨下骨裸露,关节腔大量积液。故关节腔注射木瓜蛋白酶法复制KOA模型成功,符合本实验研究对KOA家兔模型要求。2.木瓜蛋白酶复制KOA模型可能存在破坏皮下血管、肌肉途径造成家兔胃肠道症状、神经系统破坏等潜在可能,并与注射药物浓度和剂量相关,在实验过程中应该参照文献并根据实验动物一般状态进行药物剂量调整。3.施氏宿伤膏外敷干预木瓜蛋白酶家兔模型可降低KOA家兔模型膝关节皮温、改善膝关节肿胀程度及膝关节被动活动度,降低Lequesn MG行为学评分;4.施氏宿伤膏外敷治疗KOA家兔模型可以通过减少关节积液、降低血清中NLRP3、IL-1β、ASC含量,减少关节液MMP3、MMP13、IL-18含量从而改善KOA家兔模型关节内炎症状态;改善膝关节滑膜Krenn’s评分,降低关节软骨Mankin’s评分从而在一定程度上能够缓解关节软骨退化。但因模型复制方法造成家兔关节腔软骨严重破坏,故治疗后家兔恢复水平与空白组相比仍有一定差异。
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