前言 全身系统性疾病都可以引起胸膜损害，产生胸腔积液。胸腔积液性质鉴别一直是临床上重视的问题。众所周知，在胸液中找到癌细胞是诊断恶性胸腔积液的金标准，但阳性率很低，对于细胞学阴性的可疑恶性胸腔积液，测定肿瘤标记物有助于诊断。本实验旨在寻找敏感性及特异性较强的肿瘤标记物服务于临床。 甲状腺转移因子-1(TTF-1)是新近发现的肿瘤标记物，主要表达于甲状腺上皮、间脑。在成人肺组织中，其主要分布于终末呼吸道。研究表明，其对于检测肺癌特别是肺腺癌具有高度的敏感性和特异性。因此，当除外原发甲状腺癌后，可用其明确转移腺癌的原发部位是否在肺脏。本实验应用免疫组化技术检测了TTF-1在良性及恶性胸腔积液中的表达，并进行了比较分析。 近年来研究认为，肿瘤的发生是由于端粒酶的激活，但是部分学者对端粒-端粒酶假说提出了质疑，认为其除在癌组织中有高度表达外，在正常组织中也有表达。而端粒酶催化亚单位(hTERT)表达则显示出良好的肿瘤特异性和敏感性，本实验应用TRAP-ELISA法及免疫组化技术对良恶性胸水中端粒酶及hTERT分别进行了检测，并进行了比较分析。 实验材料与方法 一、实验材料 1、实验标本 共收集胸腔积液标本44例，其中男性29例，女性15例，年龄27—88岁，平均年龄60.68±15.29岁。 2、主要试剂 TTF-1免疫组化试剂盒、Envision两步法试剂盒、TERT免疫组化试剂盒、SABC试剂盒、端粒酶TRAP-ELISA检测试剂盒 二、实验方法 1、胸腔积液病人分组 依据临床及最终随访结果分为良性及恶性胸液两组，其中良性组21例，恶性组23例。 2、胸液标本处理过程 常规胸穿后，留胸水立即送检、离心，弃上清。一部分沉渣冻存，用于检测端粒酶活性。另一部分沉渣用琼脂石蜡双包埋法，制成细胞团块。常规切片后，进行HE染色，，rE RT及TTF一1免疫组织化学测定。 3、胸水CEA检测参考临床检验结果。 4、统计学处理 计量资料，用又士s表示。计数资料及配对资料，用XZ检验、精确概率法进行比较分析。全部统计资料采用SPSsl 1 .5软件完成。P<0.05为有统计学差异，P<0.01为有显著统计学差异。实验结果 一、病理改变:光镜下观察恶性胸液组切片标本，HE染色见部分切片，癌细胞呈乳头状腺腔状排列。TTF一1组化染色，在原发肺腺癌组肿瘤细胞核被染成棕黄色，为阳性。在转移肺外腺癌及肺鳞癌核未着色，为阴性。TERT组化染色，在恶性肿瘤细胞中，胞核、胞浆或胞膜染成黄色。但在良性积液中两者均呈阴性表达。 二、恶性胸液组各项指标的检测结果 1、胸水石蜡切片方法对恶性胸液的细胞学阳性检出率为90.48%，与普通涂片方法检出率52.38%相比，有显著提高(P<O，01)。 2、10例肺腺癌所致胸腔积液标本竹F一1免疫组化检测结果显示，9例核阳性，阳性率为90%。5例肺外腺癌及2例鳞癌均阴性。两组具有显著性差异(P<0.01)。竹F一1对于检测肺腺癌所致胸腔积液的敏感性为90%，特异性为100%。 3、21例恶性胸水中，端粒酶阳性为16例，阳性率为76.19%。17例TERT染色阳性，阳性率为80.95%. 三、23例良性胸水中，9例端粒酶阳性，阳性率为39.13%，但TERT及TTF一1抗体组化染色均阴性。讨论 近年来，胸腔积液患者逐渐增多，胸腔积液良恶性的鉴别一直是困惑临床医生的实际问题。临床病理检查的阳性率低，原因之一就是检侧方法的选择。长期以来医院病理科常用胸水涂片法检查，但常规涂片法中癌细胞的检出率低。为了克服这一不足，本实验应用了琼脂石蜡包埋方法进行胸水细胞学检查。实验证明，本方法对癌细胞的检出率远远高于普通涂片法。且此方法制出的切片镜下细胞成分多，细胞结构完整，图像背景清晰，厚薄均匀甚至可做出分类的病理诊断。蜡块可反复、间断切片，既可提高阳性率，又便于会诊，可长期保存并可进行各种特殊染色，而且是最好的免疫组化标本制备形式。 TTF一1主要表达于肺腺癌及甲状腺肿瘤(包括滤泡及髓质)，在小细胞肺癌中(肺内及肺外)的表达也具有很高的敏感性，但对于鉴别肺源性及肺外小细胞癌却无意义。在其他的一些肺肿瘤如大细胞癌及鳞癌中却很少表达。本实验结果显示，其对于诊断肺脏转移的腺癌性胸腔积液具有高度的敏感性和特异性，分别为90%和100%。因此，竹下一1对判定胸液中腺癌的原发部位是否在肺脏有重要意义，成为此方面唯一的最为有意义的免疫标记物。 端粒是真核细胞染色体末端的一种特殊结构。具有维持染色体末端稳定和遗传信息不丢失的功能。人类端粒酶由端粒酶RNA(hTR)、催化亚单位(hTERT7hl粥犯)和端粒酶相关蛋白l(，rEPl)组成。其中，hTERT是决定端粒酶活性的限速决定子，仅在极少数正常组织中有阳性表达。而且，其表达与端粒酶活性有高度相关性。目前，端粒酶在肿瘤组织中的表达已经成为热点问题。但近年来，许多学者对此假说提出了质疑，认为端粒酶只是一种增殖指标。本实验可以看出，端粒酶除在恶?