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细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的幼虫(细粒棘球蚴)寄生于人和多种动物的内脏器官所致的一种严重的人畜共患寄生虫病被称为细粒棘球蚴病。该病呈世界性分布,我国是高发地区之一,分布在国内23个省、市、自治区,遍布全国368个县,其中以四川西北部、新疆、青海、西藏牧区发病率最高,给我国畜牧业带来了巨大的经济损失,也给人类带来了许多环境卫生和健康安全问题。本研究扩增出细粒棘球绦虫磷酸甘油酸激酶(Eg-PGK)和泛素结合酶D2(Eg-E2D2)基因,分析其基本特征,为细粒棘球绦虫相关蛋白的研究提供重要的参考数据和资料。同时,还克隆、融合表达出细粒棘球绦虫脂肪酸结合蛋白和A31蛋白(EgFABP-EgA31)以及细粒棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶和原肌球蛋白(EgTPx-EgTrp),免疫犬后评价其免疫保护效果。一、细粒棘球绦虫磷酸甘油酸激酶基因的克隆、表达及特征分析本研究对Eg-PGK进行了克隆和原核表达,结果显示Eg-PGK大小为1248 bp,编码了415个氨基酸。免疫印迹实验显示rEg-PGK具有反应原性。用间接免疫荧光定位方法对Eg-PGK进行定位分析,发现Eg-PGK蛋白主要分布于原头蚴的表皮、顶突沟,成虫的表皮、薄壁组织及虫卵以及可育囊和不育囊上。荧光定量PCR分析发现Eg-PGK在原头蚴阶段与18日龄童虫阶段的表达量无显著差异(p>0.05)。综上所述,Eg-PGK可能对于细粒棘球绦虫的生长发育、表皮修复及抗宿主免疫有重要作用。本研究为今后Eg-PGK的功能研究提供了基础资料。二、细粒棘球绦虫泛素结合酶D2基因的克隆、表达及特征分析本研究对Eg-E2D2进行了克隆和原核表达,结果显示Eg-E2D2大小为444 bp,编码147个氨基酸。免疫印迹实验显示rEg-E2D2具有反应原性。用间接免疫荧光定位方法对Eg-E2D2基因进行定位分析,发现Eg-E2D2蛋白分布于原头蚴的表皮、顶突沟上以及成虫虫体的薄壁组织,可育囊和不育囊上也有分布。荧光定量PCR分析发现Eg-E2D2在原头蚴阶段与18日龄童虫阶段的表达量无显著差异(p>0.05)。综上所述,Eg-E2D2可能对于细粒棘球绦虫的生长发育有重要作用,对虫体是必不可少的。本研究为今后Eg-E2D2的功能研究提供了基础资料。三、2个融合蛋白(EgFABP-EgA31、EgTPx-EgTrp)对犬的免疫保护效果评价本研究克隆、融合表达出EgFABP-EgA31和EgTPx-EgTrp重组蛋白,免疫犬后攻虫,并进行抗体水平的测定,对比格犬剖检后进行虫体的计数与长宽度测量。剖检后结果显示EgFABP-EgA31组和EgTPx-EgTrp组虫体平均数量均少于对照组(p<0.05),减虫率分别为67.00%和55.43%,且免疫组的虫体长宽度均小于对照组。抗体水平显示免疫组均有较高的抗体水平,但EgFABP-EgA31组比EgTPx-EgTrp组抗体水平的上升与下降更稳定。EgFABP-EgA31组和EgTPx-EgTrp组对犬都具有一定的保护效果,EgFABP-EgA31组的效果优于EgTPx-EgTrp组。