巯基水平下降及活性氧生成在氢醌细胞毒性中的作用

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氢醌是一种重要的化合物,人群既可以通过职业接触,也可以通过日常生活接触,而且氢醌在体内又是苯和酚的主要代谢产物.该研究在体外条件下,观察了氢醌致人胚肾细胞(HEK293)凋亡的能力,对细胞内氧化还原状态的影响,并探讨了氧化还原状态改变与氢醌细胞毒性的关系.另外还观察了巯基蛋白硫氧还蛋白对氢醌毒性的影响.该研究分为三部分:第一部分:氢醌对人胚肾细胞的毒作用;该部分中,我们观察了氢醌对HEK293细胞存活率及细胞周期的影响,又通过细胞形态学改变、磷脂酰丝氨酸外翻转和亚二倍体细胞分析系统检测了氢醌致凋亡的能力.第二部分:氢醌对细胞内氧化还原状态的影响及其与氢醌细胞毒作用的关系.探讨氢醌对HEK293细胞及大鼠肾脏游离线粒体内氧化还原状态的影响以及HEK293细胞内氧化还原状态的改变对氢醌诱导凋亡的影响;为了进一步确证细胞内氧化还原状态平衡的维持与凋亡的关系,又观察了还原型谷胱甘肽合成抑制是否能诱导HEK293细胞发生凋亡.第三部分:硫氧还蛋白对氢醌细胞毒性的抑制作用.在维持细胞氧化还原状态平衡方面,除了GSH以外,硫氧还蛋白等也起着重要作用.该部分探讨了硫氧还蛋白(hTRX)对氢醌细胞毒作用的影响.采用脂质体法,将hTRX的真核表达质粒pV22-hTRX及载体质粒pV22分别转入HEK293细胞中.将获得的G418抗性单克隆细胞株hTRX12和VP22进行Westenblot和RT-PCR分析,证实在hTRX12细胞中hTRX转染并表达.
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