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目的原代培养胎鼠海马神经元,并转染包装了沉默衔接蛋白复合物-4μ亚基(adaptor-related protein complex 4,mu 1 subunit;AP4M1)基因的慢病毒后,观察细胞AP4M1、GluR1及GluR2(AMPA受体)的表达变化,以探究AP4M1可能介导的AMPA受体运输变化的分子机制。材料及方法本课题将原代培养海马神经作为实验对象,应用免疫荧光来标记神经元特异性烯醇化酶(neuron-specifice nolase,NSE),来鉴定所培养细胞中神经元的纯度。细胞培养中进行慢病毒(沉默AP4M1基因)转染,并进行荧光检测,以鉴定转染效率,实验分组:阴性慢病毒转染组及阳性慢病毒转染组(AP4M1基因表达沉默)。分别应用Real-time PCR和Western blotting方法研究AP4M1、GluR1及GluR2的mRNA及蛋白水平的表达变化。结果1、海马神经元的培养、鉴定及转染原代培养的SD大鼠胎鼠的海马神经细胞生长良好,在种植后第7天神经元基本发育成熟,神经元免疫荧光染色检测结果显示所培养细胞中的神经元纯度大于95%。在培养第2天可行慢病毒的转染,在转染8-12小时后换液,并于72小时后重复转染1次,再转染8-12h,72小时后进行荧光检测,转染率大于85%。2、海马神经元转染慢病毒后AP4M1、GluR1及GluR2的表达变化1)Real-time PCR检测:阳性病毒组AP4M1 mRNA表达量较阴性病毒组显著下调(t=68.193,P<0.01,n=8);转染后GluR1、GluR2 mRNA表达量较阴性病毒组也明显下降(t=8.060,P<0.01,n=8);(t=8.154,P<0.01,n=8)。2)Western blot检测:转染阳性病毒后AP4M1、GluR1及GluR2蛋白表达量较阴性病毒组显著下调(F=7.566,t′=15.966,P<0.01,n=8),(F=0.408,t′=8.690,P<0.01,n=8)(F=5.560,t′=13.770,P<0.01,n=8)。结论海马神经元在转染了包埋沉默AP4M1基因的慢病毒后,AP4M1的mRNA和蛋白表达明显下调,说明转染有效,进而海马神经元的GluR1、2的mRNA和蛋白表达也明显下调;AP4M1可能直接或间接调控海马神经元中的GluR1、2的转运。