NgR(Nogo receptor)是中枢神经元细胞膜上的一种蛋白,该蛋白和p75NTR及LINGO-1这两种中枢神经元细胞膜蛋白组成复合受体,介导了中枢神经系统髓磷脂中MAG、OMgp、Nogo对中枢神经元轴突生长的抑制作用,从而造成了成年哺乳动物中枢神经损伤后再生困难。在这个复合受体中NgR是抑制信号传入细胞内的第一步,因此,它的存在是中枢神经元轴突生长受到抑制的关键。RNA干扰是近年来发展起来的一种新的抑制特定基因产物表达的方法,它通过双链RNA的介导引起特异性的内源性的与之序列相近的mRNA的降解,从而阻断相应基因的表达,造成转录后水平的基因沉默。因其具有简单快速、特异、高效和经济等特点,该方法广泛应用于基因功能和基因治疗研究。根据这些研究,我们认为,如果能通过RNA干扰沉默NgR基因的表达,减少或阻止NgR蛋白的产生,使神经生长抑制信号无法通过该蛋白组成的受体抑制神经生长,有可能促进损伤后视神经的再生修复以及功能的恢复,从而挽救视功能。本实验的目的:观察正常大鼠视网膜发育过程中NgR蛋白表达的情况;研究siRNA对NgR基因表达的抑制作用。本实验分为两个部分:1、使用免疫组化的方法观察正常大鼠视网膜发育过程中NgR蛋白的表达情况。2、研究siRNA对富含NgR蛋白的体外培养海马神经细胞的NgR基因表达的抑制作用,为RNA干扰技术在视神经损伤修复过程中的应用奠定实验基础。主要结果和结论如下:1、出生24h的新生SD大鼠的视网膜上就已经存在NgR的表达,并且该表达贯穿于视网膜发育成熟的整个阶段,提示髓磷脂蛋白抑制因子和NgR之间的相互作用对神经元不仅仅是生长抑制作用,可能对神经元的生长、发育和塑形都有影响。2、以NgR基因为目标,根据siRNA的设计原则,体外化学合成siRNA,并使用阳离子脂质体转染试剂对体外培养的富含NgR蛋白的海马神经细胞进行RNA干扰,结果在转染48h后显著下调了NgR基因的表达,但在一个星期后NgR基因的表达又恢复到了正常的水平。这是否与细胞的代谢,siRNA被降解有关,还是另有其他原因?由此,可以认为,尽管RNAi技术确实能将目的基因沉默或者表达下调,但若想得到持久的基因沉默效果,仍需对其转染方式、影响因素等作进一步的研究。