【摘 要】
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该论文对酵母发酵表达柞蚕抗菌肽D所做的研究进行了报道.实验运用完整酶母细胞的高效转化方法,将含有人工合成的柞蚕抗菌肽D基因的大肠杆菌一酵母穿梭质粒pCLWA2+ABPG转入Lea
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该论文对酵母发酵表达柞蚕抗菌肽D所做的研究进行了报道.实验运用完整酶母细胞的高效转化方法,将含有人工合成的柞蚕抗菌肽D基因的大肠杆菌一酵母穿梭质粒pCLWA2+ABPG转入Lea<->型酵母AB103细胞中,通过Leu<->+Ampicilline的选择压力筛选出转化单菌落.针对质粒在酵母细胞中稳定性不高,拷贝数低而导致外源基因表达水平低的问题,用U.V.进行辐射诱变,选育出诱变株,其发酵上清液经处理后测得的抑菌圈直径较原转化菌提高20.9%.此外,对发酵条件所做的研究表明,发酵pH值的控制分为两个阶段最宜:前24小时将pH控制在5.30左右,后50小时将之保持在3.50.摇瓶发酵的通气条件最好是将摇床转速控制在325rpm.在此最佳条件下,诱变菌株M<,u-6>经48小时摇瓶发酵及24小时静置培养,用抑菌圈方法测其抗菌活力,结果表明其抑菌圈直径较原转化菌提高100%.
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