羌活不同提取物预处理对肝脏缺血再灌注损伤模型大鼠的影响

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目的:探讨羌活两种提取物对HIRI模型大鼠的影响及减小肝损伤的作用机理。方法:将82只6周龄SPF级SD大鼠随机分为空白组(Blank组,B组)、单纯模型组(Model组,M组)、羌活70%乙醇提取物预处理组(Qiang Huo Ethyl alcohol组,QH-EA组)和羌活正丁醇提取物预处理组(Qiang Huo n-Butyl alcohol组,QH-NBA组)4组,空白组10只,M组、QH-EA组及QH-NBA组各组24只。M组按照缺血30min、缺血30min复灌30min、缺血30min复灌60min组内分3组(8只/组),即I30R0组(I30R0)、I30R30组(I30R30)和I30R60组(I30R60)M组,QH-EA组按M组分组的缺血复灌时长再分为I30R0、I30R30、I30R60组别,QH-NBA组按M组分组的缺血复灌时长再分为I30R0、I30R30、I30R60组别。大鼠均适应性饲养1周,适应性饲养后用0.9%生理盐水每日按时按剂量分别对B组和M组行大鼠灌胃,用羌活70%乙醇提取物每日按时按剂量对QH-EA组大鼠进行灌胃,用羌活正丁醇提取物每日按时按剂量对QH-NBA组大鼠进行灌胃,所有组大鼠连续灌胃1周。大鼠造模只针对M组、QH-EA组和QH-NBA组,改良造模方法:大鼠常规麻醉,剖腹,钝性分离出大鼠肝脏左中叶,用无损伤动脉夹夹闭肝脏左中叶,使肝脏左中叶缺血30min,然后取走无损伤动脉夹,恢复肝脏左中叶血流灌注,在肝脏左中叶血流复灌随后的0min、30min和60min时间点,对大鼠进行下腔静脉采血,肝脏左中叶取材,运用全自动生化分析仪进行检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST),运用酶联免疫吸附(ELISA)中的双夹心抗体方法进行检测肝脏左中叶组织肿瘤坏死因子-a(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)以及血管内皮生长因子A(VEGFA)的表达水平,运用苏木精-伊红(HE)染色后光镜下观察肝脏左中叶的病理改变。结果:(1)各组转氨酶水平:M组大鼠分别在I30R0、I30R30及I30R60 3个时间点的血清ALT和AST表达水平均较B组升高(P<0.05),且于I30R60时最高;与M组大鼠比较,QH-EA组和QH-NBA组大鼠血清ALT及AST水平在I30R0、I30R30以及I30R60 3个时间点均下降(P<0.05),差异均具有统计学意义。(2)肝组织TNF-α水平:M组大鼠在I30R0、I30R30、I30R60 3个时间点的肝组织中TNF-α含量均较B组有所增高(P<0.05),且于I30R60时间点最高;与M组大鼠比较,QH-EA组大鼠肝组织TNF-α含量在I30R30和I30R60时间点均降低(P<0.05);QH-NBA组大鼠肝组织TNF-α含量在I30R0、I30R30及I30R603个时间点均降低(P<0.05),但QH-EA组与QH-NBA组大鼠比较,QH-EA组大鼠肝组织TNF-α水平在I30R30时间点有所降低(P<0.05)。(3)肝组织IL-6水平变化:M组大鼠在I30R0、I30R30及I30R60 3个时间点的肝组织中IL-6含量均较B组的增加(P<0.05),且于I30R60时最高;与M组大鼠比较,QH-EA组大鼠肝组织IL-6含量在I30R0和I30R60时间点均下降(P<0.05);QH-NBA组大鼠肝组织IL-6含量在I30R0、I30R30及I30R60 3个时间点均下降(P<0.05)。在I30R0和I30R60时间点,QH-EA组大鼠肝组织IL-6水平较QH-NBA组大鼠肝组织IL-6水平有所升高(P<0.05)。(4)肝组织VEGFA水平变化:M组大鼠在I30R0、I30R30及I30R60 3个时间点的肝组织中VEGFA含量均较B组的增加(P<0.05),且于I30R60时最高。与M组大鼠比较,QH-EA组及QH-NBA组大鼠肝组织VEGFA含量在I30R0、I30R30及I30R60 3个时间点均下降(P<0.05)。(5)造模肝叶病理切片后HE染色镜下观察:B组大鼠肝小叶结构正常,肝窦未见扩张、淤血;M组大鼠随缺血复灌的进程,可见由肝小叶结构存在,肝细胞浊肿、变性,到出现肝细胞片灶性坏死,汇管区淋巴细胞浸润,再到肝窦明显扩张、淤血的病理改变,在I30R60时间点损伤最重。QH-EA组及QH-NBA组均较各时对应点M组的病理损伤减轻。结论:羌活70%乙醇提取物预处理及羌活正丁醇提取物预处理均可以降低HIRI模型大鼠血清ALT和AST的表达水平,减少肝组织TNF-α、IL-6及VEGFA炎症因子的分泌,减轻炎症反应,减少肝细胞损伤。造模肝叶组织病理切片HE染色镜下显示:羌活70%乙醇提取物预处理及羌活正丁醇提取物预处理均可以减轻HIRI模型大鼠肝脏的损伤程度,由此推断羌活70%乙醇提取物及羌活正丁醇提取物干预能够减轻HIRI模型大鼠的肝细胞损伤,发挥其保护肝功能的作用。
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