论文部分内容阅读
本研究以广西大青山实验林场的红锥为研究对象,运用ISSR分子标记技术对红锥进行遗传多样性和遗传结构的分析。研究结果及方法如下:
1、利用改良的CTAB法提取红锥基因组DNA,以此方法提取出的DNA纯度及含量都较高,经检测可以用于ISSR-PCR扩增反应。
2、建立了适合于红锥的ISSR-PCR反应体系,最佳反应体系为:在20μL的体系中各反应物用量为:2.0μL10×Buffer、1.4μL Mg2+、0.3μL dNTP、0.8μL引物、0.2μL Taq酶、50ng模板DNA。ISSR-PCR最佳反应程式:94℃预变性5min,94℃变性30s,52~55℃(根据引物的不同其退火温度也会变化)退火45s,72℃延伸2min,共循环40次,最后一个循环结束后,72℃延伸7min,4℃保存。
3、利用ISSR技术对广西大青山实验林场5个种源区的红锥遗传多样性进行分析。选用了11条ISSR引物,共扩增出多态性位点168个,多态位点百分比为100%,不同种源区的多态位点百分比在94.64%~99.40%之间。其中博白种源区的多态位点百分比最高,高达99.40%,说明其种源内遗传变异水平是五个种源区中最高的,总的Neis遗传多样性指数为0.3697,总Shannon信息指数为0.550。各种源区的遗传相似系数在0.9503~0.9754之间,群体间的基因分化系数为0.0546,根据UPGMA聚类图分析表明,凭祥与容县遗传距离较近,浦北和博白聚类,东兰因遗传距离和地理关系单独聚为一类,这与地理分布大致相符。
4、在分子水平上分析了红锥群体的遗传变异与地理地貌变化的关系,对32个家系的红锥遗传多样性记性统计分析,结果显示红锥遗传多样性在32个家系之间存在一定的差异。有效基因数、Nei’s遗传多样性指数、Shannon信息指数都揭示出32个红锥家系遗传多样性的丰富性。
5、提出了红锥优良家系的保护和利用方案,充分了解红锥在遗传变异的空间分布格局对于制定科学的优质基因资源保护和利用策略所具有的重要作用。在对红锥遗传改良工作的过程中,优良个体、优良群体和优良种源选择都不容忽视。群体及群体内个体的保护保存很重要,尤其是特殊生境群体和在分类与遗传上具有不可替代的独特性的群体需重点保护。如博白群体特异带所占比例最高,为99.4%,拥有其他群体没有的基因类型,且博白群体的遗传多样性指数明显高于其他群体,群体内个体的基因型十分丰富。群体间的遗传分化指数Gst为0.0546,即群体间的遗传变异占总变异的5.46%,群体内遗传多样性远大于群体间遗传多样性。所以红锥的遗传改良应主要集中在群体内个体的改良上,同时也要考虑群体间优良群体的选择,通过群体选择和优树选择相互配合,从而取得最大的遗传增益。