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目的:因DSIP在体内的含量极少,分离纯化十分繁琐。本实验模拟内源性睡眠肽,人工合成DSIP及其同系物后分析纯化。研究人工合成的DSIP及其同系物是否具有促眠作用,在相同剂量下,两者的促眠作用有什么区别。进一步比较鼻腔给药及静脉给药的促眠作用,并研究其对脑组织的毒副作用。以获得药效高、给药方便、无毒副作用的促眠多肽药物。 方法:①采用Fmoc固相合成法人工合成DSIP及其同系物,采用高效液相色谱法和质谱法分析提纯及鉴定,确定合成的多肽即为设计的目的肽。②通过动物实验观察人工合成的DSIP及其同系物的促眠作用。首先用大鼠及新西兰大耳白兔行为学试验初步判定人工合成DSIP及其同系物是否有促眠作用。第二步,确认其效果后给新西兰大耳白兔通过静脉注射目的肽、测定并分析脑电图检测人工合成的DSIP及其同系物是否具有促进家兔睡眠的作用,比较不同剂量下的促眠作用及两种肽的作用。第三步,比较研究DSIP及其同系物鼻腔给药与静脉给药的效果。③通过病理学检测人工合成的睡眠肽DSIP及其同系物在大中剂量一定时期给药后对脑组织细胞是否有损伤。 结果:①合成具有生物活性的人工睡眠肽DSIP及其同系物,经高效液相色谱法纯化后达到95％以上纯度,最后经质谱法确认。②用大鼠和新西兰大耳白兔完成行为学试验,初步验证DSIP及其同系物具有促眠作用。③对新西兰大耳白兔脑电图数据的统计学分析提示,静脉给药时,DSIP及其同系物组家兔均与生理盐水组家兔慢波睡眠时间统计学有显著性差异,给药组慢波睡眠时间长。且在相同剂量下,静脉给药DSIP组的慢波睡眠时间高于静脉给药DSIP同系物组的慢波睡眠时间。④课题组前期实验结果表明,人工合成的睡眠肽DSIP通过15、30、45nmol/kg剂量鼻腔给药均可得到静注相近的促眠作用。而本组实验结果为,鼻腔给予DSIP同系物30nmol/kg和45nmol/kg组家兔用药前后比较统计学有显著性差异,给药后慢波睡眠时间增加。鼻腔给药DSIP同系物30nmol/kg组家兔与静注DSIP同系物30nmol/kg组家兔慢波睡眠时间统计学无显著性差异。⑤中长期静脉给予大中剂量DSIP及其同系物,光镜下观察经HE染色的大鼠脑组织切片,无明显差异。 结论:①成功合成具有生物活性的人工睡眠肽DSIP及其同系物。②人工合成的睡眠肽DSIP及其同系物有促眠作用,且在相同剂量下,静脉给予DSIP的慢波睡眠时间高于静脉给予其同系物的慢波睡眠时间。③人工合成的DSIP及其同系物通过鼻腔给药30nmol/kg即可得到静注剂量30nmol/kg大致相同的促眠作用。④中长期大中剂量静脉给予DSIP及其同系物对脑组织细胞无明显损伤。