【摘 要】
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目的:本文设计发明了一种特异性检测谷氨酰转肽酶（GGT）的探针Cy-GGT来验证氧化应激和GGT的相关性,并用其评估肺纤维化的细胞和小鼠模型中GGT 水平的变化。本文同时设计发明了一种特异性检测环氧化酶2（COX-2）的近红外荧光探针Cy-COX,用于评估肺纤维化细胞和小鼠模型中COX-2的变化以及探讨COX-2对肺纤维化的保护性作用。方法:将γ-谷氨酰基的特异性识别部分整合到荧光团单元中,以获得
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目的:本文设计发明了一种特异性检测谷氨酰转肽酶（GGT）的探针Cy-GGT来验证氧化应激和GGT的相关性,并用其评估肺纤维化的细胞和小鼠模型中GGT 水平的变化。本文同时设计发明了一种特异性检测环氧化酶2（COX-2）的近红外荧光探针Cy-COX,用于评估肺纤维化细胞和小鼠模型中COX-2的变化以及探讨COX-2对肺纤维化的保护性作用。方法:将γ-谷氨酰基的特异性识别部分整合到荧光团单元中,以获得用于检测GGT的探针Cy-GGT。用百草枯刺激肺泡Ⅱ型上皮细胞（RLE-6TN细胞）8h形成氧化应激模型,用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激RLE-6TN细胞建立肺纤维化细胞模型。通过Western Blot（WB）检测蛋白表达。博来霉素经小鼠气管灌注肺后建立肺纤维化小鼠模型。HE、Masson染色验证肺纤维化的程度。用探针Cy-GGT检测细胞模型和小鼠模型。选择吲哚美辛（IMC）为特异性检测COX-2的响应基团,通过己二胺链将IMC和荧光团相连接获得探针Cy-COX。用TGF-β1刺激成纤维细胞（MRC-5细胞）和RLE-6TN细胞建立肺纤维化的细胞模型。利用转染技术过表达COX-2的含量,用探针Cy-COX检测细胞和小鼠模型。结果:细胞在氧化应激状态下,探针Cy-GGT成像结果表明GGT 水平升高。在TGF-β1刺激细胞72h后,探针Cy-GGT成像结果表明GGT水平升高。在第28天的肺纤维化小鼠模型成像结果表明GGT水平升高。在TGF-β1刺激细胞24h后,探针Cy-COX成像结果表明COX-2水平升高。在TGF-β1刺激细胞72h后,探针Cy-COX成像结果表明COX-2水平明显降低。增加COX-2含量后Ⅰ型胶原蛋白、α-平滑肌肌动蛋白表达降低。肺纤维化的小鼠模型成像结果表明COX-2水平在博来霉素刺激第7天后增加,第14天后达到最高,之后逐渐减少,第28天达到最低,但仍高于对照组。结论:1.探针Cy-GGT、Cy-COX分别可以用于检测内源性GGT、COX-2的变化。2.GGT与氧化应激密切相关,可以作为肺纤维化活动期检测的新指标。3.COX-2对肺纤维化具有保护作用,探针Cy-COX能够用于肺纤维化形成早期的诊断。
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