尿毒症患者肠道细菌对小分子尿毒素的分解作用

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目的探讨尿毒症患者肠道菌群变化及其对小分子尿毒素的分解作用。方法1.实验对象与分组:尿毒症患者和正常人各48例,利用随机数字表法分成6个亚组。若亚组中有一个以上标本未培养出细菌则从该组中随机抽补。2.实验步骤:标本处理:制备无菌标本管。酒精灯火焰15cm范围内,取受试者新鲜大便(30min~120min),在电子天平上称取3份标本,每份1g,分装3支无菌试管。无菌操作室中将3支无菌试管用无菌生理盐水稀释成1:5,1:10,1:20不同稀释度并混匀。点样:生物安全柜(超净工作台)中用微量移液枪分别取上述混匀液2μl涂布于血琼脂培养基。孵育:将培养基置37℃培养箱中孵育24小时观察结果。菌群鉴定:观察菌落性状,染色,显微镜检查,生化鉴定。菌落计数:数出每个平皿菌落数,取其平均值,计算出1g粪便中细菌含量。每克大便细菌数=平板上菌落数×稀释倍数×5×105。对小分子尿毒素的分解:称取肌酐15mg、尿酸14mg、尿素40mg,溶于少许生理盐水中,于0.22μm微孔滤器过滤菌,然后加入100ml营养肉汤培养基中,摇匀后分装于1.5ml eppendorf管,每管1ml。分别挑取正常人和尿毒症患者的肠道细菌菌落1个放入上述eppendorf管中,在旋涡震荡器上混匀,放入37℃恒温培养箱培养24h,设立对照组(不加菌落),培养前后于全自动生化检测仪盲法检测培养基中的小分子尿毒素浓度。整个实验过程均注意无菌操作。结果:(X±SD)1.肠道菌群分析(×108·g-1)正常组(A)与尿毒症组(B)比较:大肠杆菌:A组2.6±0.12,B组11.8±0.21,B组比A组增多(P<0.001)。粪肠球菌:A组2.12±0.09,B组3.46±1.01,B组比A组增多(P=0.007)。普通变形杆菌:A组0.07±0.03,B组0.13±0.02,B组比A组增多(P=0.001)。阴沟杆菌:A组0.14±0.03,B组0.24±0.05,B组比A组增多(P<0.001)。弗劳地枸橼酸杆菌:A组0.23±0.1,B组0.92±0.13,B组比A组增多(P<0.001)。枯草杆菌:A组0.12±0.03,B组0.32±0.05,B组比A组增多(P<0.001)。正常组中细菌分布示大肠杆菌比粪肠球菌多(P<0.001)。粪肠球菌比弗劳地枸橼酸杆菌多(P<0.001)。弗劳地枸橼酸杆菌比阴沟杆菌多(P=0.041)。阴沟杆菌与枯草杆菌无明显差异(P=0.152)。阴沟杆菌与枯草杆菌比普通变形杆菌多(P<0.001.P=0.005)。尿毒症组细菌分布示大肠杆菌比粪肠球菌多(P<0.001)。粪肠球菌比弗劳地枸橼酸杆菌多(P<0.001)。弗劳地枸橼酸杆菌比枯草杆菌多(P<0.001)。枯草杆菌比阴沟杆菌多(P=0.007)。阴沟杆菌比普通变形杆菌多(P<0.001)。2.细菌对小分子尿毒素的分解作用1)对照组(A)与正常组(B)与尿毒症组(C)比较:分解肌酐(umol/L):大肠杆菌:A组2.43±0.94,B组46.18±10.12,C组100.69±11.94。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。粪肠球菌:A组3.23±0.91,B组23.54±3.66,C组33.67±3.34。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。普通变形杆菌:A组2.78±0.25,B组8.34±0.38,C组32.27±3.18。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。阴沟杆菌:A组3.05±0.16,B组21.33±1.09,C组34.52±1.43。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。弗劳地枸橼酸杆菌:A组2.34±0.15,B组4.52±0.11,C组12.17±0.15。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组较B组强(P<0.001)。枯草杆菌:A组1.03±0.28,B组2.28±0.15,C组8.8±0.75。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。分解尿素(mmol/L):大肠杆菌:A组0.02±0.01,B组0.12±0.02,C组2.74±0.07。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。粪肠球菌:A组0.04±0.02,B组0.13±0.02,C组1.21±0.08。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。普通变形杆菌:A组0.03±0.01,B组2.46±0.14,C组9.66±0.15。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。阴沟杆菌:A组0.08±0.02,B组0.35±0.03,C组1.38±0.26。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。弗劳地枸橼酸杆菌:A组0.06±0.01,B组0.27±0.04,C组0.95±0.07。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组较B组强(P<0.001)。枯草杆菌:A组0.06±0.01,B组1.09±0.14,C组2.14±0.1。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。分解尿酸(umol/L):大肠杆菌:A组2.16±0.32,B组21.85±1.26,C组33.27±4.32。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。粪肠球菌:A组0.25±0.09,B组0.73±0.18,C组1.98±0.15。B组与C组都有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。普通变形杆菌:A组0.66±0.12,B组0.76±0.16,C组1.44±0.1。C组有分解能力(P<0.001),B组没有分解能力(P=0.244),C组比B组强(P<0.001)。阴沟杆菌:A组2.09±0.11,B组3.43±0.27,C组4.97±0.16。B组与C组有分解能力(P<0.001.P<0.001),C组比B组强(P<0.001)。弗劳地枸橼酸杆菌:A组0.38±0.07,B组0.43±0.09,C组0.68±0.08。C组有分解能力(P<0.001),B组没有分解能力(P=0.249),C组较B组强(P<0.001)。枯草杆菌:A组1.06±0.07,B组1.24±0.27,C组1.59±0.16。C组有分解能力(P<0.001),B组没有分解能力(P=0.105),C组比B组强(P=0.009)。2)尿毒症组内比较:分解肌酐:大肠杆菌比阴沟杆菌强(P<0.001),阴沟杆菌与粪肠球菌、普通变形杆菌无明显差异(P=0.528.P=0.089),粪肠球菌与普通变形杆菌无明显差异(P=0.402),普通变形杆菌比弗劳地枸橼酸杆菌强(P<0.001),弗劳地枸橼酸杆菌比枯草杆菌强(P<0.001)。分解尿素:普通变形杆菌比大肠杆菌强(P=<0.001),大肠杆菌比枯草杆菌强(P<0.001),枯草杆菌比阴沟杆菌强(P<0.001),阴沟杆菌与粪肠球菌无明显差异(P=0.111),阴沟杆菌、粪肠球菌比弗劳地枸橼酸杆菌强(P=0.002.P<0.001)。分解尿酸:大肠杆菌比阴沟杆菌强(P<0.001),阴沟杆菌比粪肠球菌强(P<0.001),粪肠球菌比枯草杆菌强(P<0.001),枯草杆菌比普通变杆菌强(P=0.048),普通变形杆菌比弗劳地枸橼酸杆菌强(P<0.001)。结论:1.尿毒症肠道菌群呈过度生长。2.尿毒症肠道菌群对小分子尿毒素的分解作用增强。3.尿毒症状态下,大肠杆菌分解肌酐、尿酸能力最强,普通变形杆菌分解尿素能力最强。4.大肠杆菌可以作为尿毒症肠道细菌疗法的侯选菌。
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