论文部分内容阅读
兰科(Orchidaceae)植物是一类重要的植物资源,具有较大的观赏价值和药用价值,市场需求大。由于自然状态下,兰科植物种子萌发困难,繁殖系数较低,采用组培技术虽可实现大量繁殖,但组培苗移栽驯化存活率低、生长发育缓慢,其重要原因在于其生命过程离不开共生菌的参与,因此研究菌苗共生对兰科植物的繁殖和保育具有重要的意义。血叶兰(Ludisia discolor)为海南传统黎药,具有独特的观赏价值和药用价值。由于其本身复杂的繁育系统及人为采伐导致的生境破坏,造成野生血叶兰极度匮乏。因此,本文以血叶兰为研究对象,对血叶兰种子进行非共生萌发,从而优化快速繁殖体系;并对野生血叶兰进行内生真菌的分离,探讨其内生真菌群落组成;将组培苗与分离到的内生真菌进行共生培养,从而筛选出具有促进作用的内生真菌,为血叶兰种苗的快速繁育与生产提供有价值的理论依据,对血叶兰种质资源繁殖保育具有重要意义。主要结果如下:1、血叶兰快繁体系优化(1)在非共生萌发的试验中发现,血叶兰最佳萌发培养基为KC+土豆20 g/L时,萌动时间最早,且萌发率高达88.44%;(2)对根状茎进行诱导分化,最佳诱导培养基为添加花宝4号的为培养基,其分化芽率98.30%,且萌发整齐、健壮;(3)以不同浓度的KT和NAA对血叶兰进行增殖,最佳增殖培养基为3.0mg/L KT+0.3mg/L NAA为,其增殖倍数为5.05倍,且增殖芽长势较佳;(4)在壮苗生根培养中,添加0.5mg/L IBA+0.5mg/L NAA+10g/L 香蕉有利于增加血叶兰株高;0.5mg/L IBA+0.1mg/L NAA+100g/L香蕉有利于血叶兰生根培养基,综合最优组合还是0.5mg/L IBA+0.1mg/L NAA+100g/L香蕉,平均株高8.97 cm,平均生根数大3.59条;(5)最佳炼苗移栽基质为水苔,移栽成活率达到100%,且植株健康。2、血叶兰内生真菌多样性以野生血叶兰为研究材料进行内生真菌分离,获得66株内生真菌,经分子生物学鉴定,归为2目4纲18属,显示了血叶兰内生真菌的多样性,其中以刺盘孢属(Collettotrichum)为优势类群,占菌株总数33.33%;其次是曲霉属(Asoergillus)真菌,同时也分离到镰刀菌属(Fusariium)和链格孢属(Alternaria)。血叶兰不同部位内生真菌的分离率,以茎部的分离频率最高,为36.26%;叶片次之,为34.85%;根部最低,为28.79%,其中根部与茎段都以刺盘孢属(Colletotrichum)最多,分别占菌株总数36.84%与50.00%。不同组织中,叶的多样性指数和均匀度指数最高,分别为2.75和1.19;相似性系数为0.381,根与叶部位内生真菌的相似性系数最低,为0.267,但都表现为中等程度不相似。3、共生真菌筛选获得6株菌株能与血叶兰组培苗共生并起到促生作用,血叶兰与G9菌株共培养90d后,其平均鲜重增加率55.01%、株高8.76cm、茎粗0.48mm、生根数3.60条;其中G6菌株促进生根数最多4.40条,G11菌株(3.94 cm)则对根长起到促进作用。其中G6 菌株属于 Alternaria sp.,G9 与 Y21 菌株属于Colletotrichum sp.,G11 与 Y20 菌株属Daldinia sp.,Y6菌株属于Trichoderma sp.,可看出同一属不同种菌株对血叶兰起到的作用不同。