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替曲朵辛，中文别名河豚毒素，英文名称tetrodotoxin，简写为TTX。替曲朵辛是一种高活性的海洋生物毒素，具有镇痛、戒毒、抗心律失常等药理活性，是海洋创新药物研究领域的热点。本论文采用化学标记法制备了[3H]TTX，开展定位[3H]TTX在大鼠体内药代动力学研究，采用流化床底喷上药与包衣法制备了微量替曲朵辛速释微丸与肠溶缓释微丸，开展2种微丸制剂在动物体内的镇痛作用研究。制备了替曲朵辛盐酸利多卡因复方制剂，该复方制剂具有扭转室性心律失常作用。研究工作对突破替曲朵辛非临床药代动力学研究技术难点、拓展替曲朵辛临床应用治疗窗与适应症，开展替曲朵辛创新药物研究等方面具有一定的创新与应用价值。主要研究内容如下: 1.[3H]TTX的制备研究 以TTX为原料，经DCC氧化，获得TTX的氧化物11-oxo-TTX，然后经硼氚化钠还原，引入11-[3H]标记物，经HPLC分离纯化获得[3H]TTX，LC/(+)ESI-FTMS分析纯化产物与TTX标准品具有相同的HPLC保留时间，一致的质谱裂解规律，证明该化合物为[3H]TTX，纯化后[3H]TTX的放射性纯度为90.71％。 2.[3H]TTX在大鼠体内的药代动力学研究 雌雄大鼠血浆总放射性的药代动力学特征相似，干燥处理后的血浆中总放射性平均驻留时间(MRT)为1.62h，估算的平均终末半衰期(t1/2)为2.31h。[3H]TTX在大鼠体内给药0～72h后放射性的总回收率为给药量的69.35％，总放射性在雌雄大鼠体内的分布和消除行为相似，在胃壁、肾脏和肺脏中的分布浓度较高，大部分组织器官的达峰时间为0.5h。使用高效液相色谱联用低能量放射性核素检测技术获得了血浆、尿液和粪便样品的放射性代谢物谱，并利用液质联用等技术鉴定了1个代谢物，为单氧化的替曲朵辛，同时提供了替曲朵辛在大鼠体内可能的代谢途径。 3.替曲朵辛速释与肠溶缓释微丸的制备研究 建立了微丸体外释放度测定方法，确定了制备替曲朵辛速释微丸与肠溶缓释微丸的处方与工艺条件，该速释制剂以蔗糖丸芯为药物载体，采用流化床底喷上药方法制备载药微丸，该工艺具有上药率高、含量均匀度好、释药迅速等优点，符合速释制剂的标准。载药丸芯依次以Eudragit NE30D为缓释膜层，HPMC为隔离膜层，Eudragit L30D-55为肠溶膜层经流化床包衣制备肠溶缓释微丸。制备的微丸样品能稳定释放12h，符合肠溶缓释制剂的标准。 4.替曲朵辛速释与肠溶缓释微丸的急性毒性与镇痛作用研究 经口给予SD雌雄大鼠替曲朵辛速释微丸，LD50517.43μg·kg-1。大鼠热板试验结果显示，灌胃给予替曲朵辛速释微丸40、60和80μg·kg-1后，30min起效，镇痛作用维持1.5～3h，以80μg·kg-1作用最强。在醋酸致大鼠扭体试验中存在较好的时效及量效关系，20、30和40μg·kg-1速释微丸均体现了较强的镇痛作用，15～30min起效，作用维持3h。其ED50约为21.04μg·kg-1，治疗指数为24.59，较肌肉注射和皮下注射安全性大为提升。 肠溶缓释微丸LD50=840.13μg·kg-1，与速释制剂相比，提高了1.62倍，安全性显著提高。大鼠热板试验结果显示，灌胃给予替曲朵辛肠溶缓释微丸40、60和80μg·kg-1后，药物3～12h维持稳定疗效。在醋酸致大鼠扭体试验中，20、40、60和80μg·kg-1肠溶缓释微丸在给药后1.5～9h镇痛作用抑制百分率均能在50％以上，3～6h作用最强。 5.注射用替曲朵辛利多卡因复方制剂的制备及抗心律失常研究 研究制备了替曲朵辛盐酸利多卡因冻干粉针复方制剂，在大鼠体内开展了优选复方制剂/单方抗心律失常对照实验，结果显示制备的复方制剂（每剂量由1μgTTX和5mg盐酸利多卡因组成）与单方相比，具有完全扭转室性心律失常引起的死亡率等作用，该复方制剂适于致死性室性抗心律失常药物的研发。