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自噬作为广泛参与机体生长、更新和免疫防御功能。尽管炎症反应可以先天保护身体免受感染或组织损伤。研究发现自噬与炎症反应之间关系密切,相辅相成,可以通过直接抑制炎症复合物和间接去除受损的细胞器或致病微生物等炎症刺激物,从而保护细胞免于过度的炎症,一些参与免疫的细胞因子也可以诱导自噬。一些免疫活性物质可能对对自噬与炎症造成影响。大豆中可以提取出具有免疫活性的大豆肽,本文以具有免疫活性的大豆寡肽QRPR(Gln-Arg-Pro-Arg)为原料,应用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型,利用体外化学实验和分子生物学相关技术对具有免疫活性的大豆寡肽QRPR进行了抗炎研究和免疫活性评价,探索了大豆寡肽QRPR通过调控RAW264.7细胞自噬来减弱炎症反应的机制。首先建立细胞炎症模型,用脂多糖(LPS)作用于小鼠巨噬细胞(RAW264.7)建立炎症模型,通过酶联免疫吸附实验确定LPS浓度为100ng/m L,处理时间为16h时为最佳造模条件,用大豆寡肽QRPR作用于RAW264.7细胞炎症模型,发现QRPR可以降低模型中细胞因子TNF-α和IL-6的含量且具有剂量依赖性。然后为了证明QRPR抗炎症作用是否与自噬有关,用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)处理细胞,然后用大豆寡肽QRPR和LPS共同刺激16h。结果表明自噬受抑制组RAW264.7炎症模型的IL-6和TNF-α分泌增加,QRPR肽的抗炎效果在自噬被抑制后明显减弱,说明QRPR对RAW264.7细胞炎症的保护是通过自噬来调控的。蛋白免疫印迹实验结果显示,随着QRPR时间的增加,自噬标志蛋白LC3II蛋白表达量逐渐增加,下游蛋白SQSTM1/P62表达量降低,说明QRPR可以激活RAW264.7细胞的自噬,并且呈现出明显的时间依赖性。荧光显微镜下观察MDC染色,QRPR肽处理组显示出更强的荧光亮度,进一步证明了QRPR肽对自噬的诱导效果。但是QRPR肽具体调控自噬的机制有待下一步深入探究。最后对QRPR激活自噬的机制进行研究,Western-blot对PI3K/AKT/mTOR通路中蛋白进行检测,发现QRPR可以抑制AKT与mTOR蛋白表达,但对PI3K表达无明显影响。实时荧光定量PCR在基因水平进行检测,发现PI3K、AKT和mTOR三种基因表达量均下降。同时透射电镜观察细胞内部结构,发现QRPR处理组细胞内部观察到双层膜结构的自噬小体和自噬溶酶体的产生。说明QRPR一定程度上抑制了PI3K/AKT/m TOR通路从而激活了自噬。本研究还利用流式细胞术观察加入QRPR后对RAW264.7细胞周期的影响,RAW264.7细胞G1期细胞增多,S期细胞减少(p<0.05),QRPR延缓了细胞从G1期进入S期,细胞周期的运行受到抑制,与Western-blot和RT-PCR结果相符。总之,上述实验证明了大豆寡肽QRPR通过调控PI3K/AKT/mTOR通路激活自噬,减弱了RAW264.7细胞模型的炎症反应,为大豆免疫活性肽在抗炎与免疫的应用提供了一定的理论基础。