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西尼罗热(West Nile Fever,WNF)是一种由西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)引起的具有严重威胁的外来人畜共患病。人和动物在感染WNV后会出现发热、脑膜炎、脑炎等症状,甚至引起死亡,因此该病毒在全球范围内引起了广泛的关注。西尼罗热曾于2012年在美国爆发,引起了118人死亡,目前,我国未报道有WNF的临床病例,但是我国自然地理环境复杂多样,存在蚊虫媒介繁殖和鸟类迁徙的天然条件,应提早引起重视,因此WNV在我国出入境监督防预系统中有重要的研究价值。WNV属于黄病毒科、黄病毒属、日本脑炎血清群,是有囊膜的单股正链RNA病毒。WNV的结构蛋白包括C(capsid)蛋白、E(envelope)蛋白和M(membrane)蛋白。E蛋白是WNV表面最重要的结构蛋白,其表面的抗原决定簇与中和活性、组织嗜性、血清特异性、病毒的毒力、宿主范围有关。新城疫病毒(Newcastle Disease virus,NDV)的低致病性毒株LaSota株对哺乳动物不能产生有效感染,只在禽源组织中复制,并且具有外源蛋白表达效率高与生产成本低的优点。以NDV为载体的重组疫苗其安全性和有效性在猪、犬、猫、非洲绿猴等多种动物得到证明。NDV活载体疫苗可以有效诱导机体产生粘膜、体液及细胞免疫反应。目前,我国虽没有WNV感染的病例报道,但鉴于该病毒传入我国的高风险以及对人类极强的感染力和致病力,安全有效的储备性疫苗的研制开发显得尤为重要。从近几年的WNV感染流行情况来看,流行范围正在趋于全球化,而且发生神经症状的比例显著增加,世界各国针对WNV研制的疫苗在实际应用中相继出现了各种问题。本实验室建立起的新城疫病毒反向遗传学操作平台,成功构建并获得表达H5亚型禽流感病毒保护性HA蛋白的重组NDV、表达狂犬病毒囊膜糖蛋白的重组NDV、分别表达尼帕病毒G蛋白和F蛋白的重组NDV等,这些重组病毒的安全性和有效性已经在实验动物和本体动物上获得验证,继而表明NDV作为活病毒疫苗载体具有极大的优势,同样也是对于构建新型疫苗防治人类和哺乳动物疾病是非常有前景的载体。本研究利用反向遗传操作系统,将人工合成的WNV prM和E基因与新城疫病毒LaSota疫苗株毒重组,拯救得到表达WNV pr M和E蛋白的重组病毒rLa-WNV-prM/E,并在6周龄雌性C57BL/6小鼠上对其安全性和免疫原性进行评价。RT-PCR、间接免疫荧光和激光共聚焦等试验证明WNV prM和E基因能够正确插入和表达;对鸡胚、小鼠和鸡的动物试验结果表明重组病毒rLa-WNV-prM/E没有增强载体病毒NDV LaSota疫苗株对小鼠和鸡的致病力,具有良好生物安全性;利用Elisa、蚀斑减少中和试验和流式细胞术等技术检测重组病毒r La-WNV-prM/E接种C57BL/6小鼠后诱导其产生的显著的特异性IgG、中和抗体、CD4+及CD8+T淋巴细胞反应,说明rLa-WNV-pr M/E能够诱导机体产生高水平的抗WNV prM/E的特异性体液免疫和特异性细胞免疫反应。本研究表明重组病毒rLa-WNV-prM/E作为防控WNV的储备性疫苗具有潜在的应用价值。