【摘 要】
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目的:探讨肝癌细胞溢出的miR-21能否通过有机阴离子转运体2（OAT2）,调控PDCD4蛋白的表达,进而影响细胞增殖。方法:1.Cy5标记miR-21,hoechest33342标记细胞核,激光共聚焦显微镜观察miR-21能否进入细胞;2.采用RT-qPCR检测LO2细胞和Huh7细胞中miR-21表达水平;3.RT-qPCR和Western Blot检测LO2细胞和Huh7细胞中PDCD4 m
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目的:探讨肝癌细胞溢出的miR-21能否通过有机阴离子转运体2（OAT2）,调控PDCD4蛋白的表达,进而影响细胞增殖。方法:1.Cy5标记miR-21,hoechest33342标记细胞核,激光共聚焦显微镜观察miR-21能否进入细胞;2.采用RT-qPCR检测LO2细胞和Huh7细胞中miR-21表达水平;3.RT-qPCR和Western Blot检测LO2细胞和Huh7细胞中PDCD4 m RNA、OAT2 m RNA及对应蛋白表达水平;4.设Control、LO2+Huh7、miR-21 mimics共3组,Western Blot检测每组LO2细胞中PDCD4蛋白表达水平;RT-qPCR检测与Huh7细胞共培养的LO2细胞中miR-21、PDCD4 m RNA表达水平;5.用不同浓度胆汁酸处理LO2细胞,CCK8实验筛选胆汁酸最佳浓度;RT-qPCR方法分析胆汁酸抑制OAT2 m RNA表达最适浓度;6.设Control、miR-21 mimics、miR-21 mimics+胆汁酸、胆汁酸共4组,Western Blot检测PDCD4蛋白表达水平;7.设Control、miR-21 mimics组,细胞处理48 h后,k Fluor-488click-it Edu成像实验检测其DNA增殖情况;CCK8实验分别检测细胞被处理24 h,48 h,72 h后在波长460 nm处的吸光度值并做比较。结果:1.激光共聚焦显微镜显示,与Control组相比,miR-21 mimics组可以观察到荧光标记的miR-21进入LO2细胞;2.RT-qPCR结果显示,LO2细胞中miR-21水平明显低于Huh7细胞（p＜0.05）,提示HCC细胞中的miR-21外溢可进入HCC细胞旁的正常肝细胞中;3.RT-qPCR和Western Blot结果显示,LO2细胞中PDCD4 m RNA和蛋白水平高于Huh7细胞（p＜0.05）,与LO2细胞相比,Huh7细胞中OAT2 m RNA和蛋白水平偏高（p＜0.01）;4.与Control相比,与Huh7细胞共培养的LO2细胞及经miR-21 mimics处理的LO2细胞,PDCD4蛋白表达均显著下调（p＜0.05）;RT-qPCR结果显示,与Huh7细胞共培养的LO2细胞miR-21表达高于单独培养的LO2细胞（p＜0.05）,而PDCD4 m RNA表达显著下调（p＜0.01）;5.不同浓度胆汁酸作用于LO2细胞48 h后,超过100μM时,具有明显细胞毒性（p＜0.01）;RT-qPCR结果显示,50μM的胆汁酸作用于LO2细胞时OAT2m RNA下调最明显（p＜0.01）;6.与Control相比,miR-21 mimics,miR-21 mimics+胆汁酸PDCD4蛋白表达水平明显偏低（p＜0.05）。但miR-21 mimics+胆汁酸组PDCD4蛋白表达高于miR-21 mimics组（p＜0.01）;7.经miR-21 mimics处理的LO2细胞DNA复制能力明显高于对照组（p＜0.05）;同样在460 nm波长处对照组的吸光度值较miR-21 mimicsc处理组的吸光度值增加缓慢（p＞0.05）。结论:细胞外miR-21可以通过有机阴离子转运体2进入LO2细胞,下调PDCD4蛋白的表达,促进细胞增殖。
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